本文關(guān)鍵詞：甲殼素載體支架的生物相容性和對角膜上皮損傷的修復研究

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【摘要】：目的：角膜是眼球的第一道屏障，對維持視覺具有極其重要的作用。角膜上皮細胞的穩(wěn)態(tài)對于維持眼表完整和視覺功能具有極其重要的作用，角膜上皮受損會影響人的正常生活，尤其當角膜緣受損嚴重時，角膜上皮無法再生修復，因此需要選擇合適而有效的方法重建角膜上皮層。目前常用組織工程的方法構(gòu)建角膜上皮層，然而組織工程角膜載體支架材料的應(yīng)用受到柔韌性、降解速率、免疫排斥反應(yīng)等的限制，因此選擇一種安全無毒性、柔韌性好、降解速率合適、免疫排斥反應(yīng)低且易獲取的材料成為目前組織工程角膜支架材料研究的熱點。甲殼素具有抑菌性、能促進細胞新陳代謝，并能提高機體免疫力等功效，而且無毒副作用，無免疫原性，在生物醫(yī)用材料方面有很多應(yīng)用。 方法：本研究以甲殼素為主要材料，主要進行了以下實驗研究： 1、甲殼素性質(zhì)、甲殼素混合膜制備及理化性質(zhì)測定：對甲殼素分子量、脫乙酰度以及紅外結(jié)構(gòu)表征等理化性質(zhì)進行測定；將甲殼素與硫酸軟骨素按一定比例制備甲殼素混合膜，并對其厚度、含水量、透光率、機械性能等理化性質(zhì)進行測定； 2、甲殼素混合膜生物相容性：將甲殼素混合曲率膜片貼附于新西蘭大白兔眼表，通過對其眼部的定時觀察來了解共混膜對兔眼的刺激反應(yīng)；通過MTT法評價甲殼素混合膜的細胞毒性，并用掃描電鏡觀察細胞在混合膜上的生長貼附情況；將混合膜植入大鼠皮下和腿部肌肉觀察其體內(nèi)降解情況和組織相容性。 3、載細胞混合膜對角膜上皮損傷的修復作用：將載細胞甲殼素混合曲率膜移植到受損的兔角膜上皮層表面，定時進行熒光染色觀察其修復情況，并對修復后的角膜上皮層進行病理學和掃描電鏡觀察。 結(jié)果： 1、本文主要研究材料為脫乙酰度相對較低的大分子量甲殼素，其脫乙酰度為19.33%，分子量為2×10~6KD，并確定了甲殼素混合平面膜和曲率膜的制備方法。制備的甲殼素混合膜厚度在0.2mm左右；在400-800nm之間的透光率均大于80%；含水量為81.59%，與人角膜基質(zhì)含水量接近；干態(tài)下拉伸強度達到14.925MPa，濕態(tài)下拉伸強度為3.28MPa，與人眼角膜濕態(tài)抗張強度(4MPa)較為接近。 2、甲殼素混合膜對兔眼無刺激反應(yīng)，，無細胞毒性，細胞相容性好，并能促進角膜上皮細胞在混合膜上的增殖生長。體內(nèi)降解時間相對較慢，皮下為22w，肌肉處為18w，組織相容性好，炎癥反應(yīng)小，說明該材料具有良好的生物相容性。 3、與對照組相比載細胞甲殼素混合膜能加速角膜上皮細胞的損傷修復速率，且修復后的角膜上皮層結(jié)構(gòu)致密整齊。 結(jié)論：以甲殼素和硫酸軟骨素為材料制備的組織工程角膜載體支架材料基本符合組織工程角膜材料的要求，為組織工程角膜載體支架材料的研究奠定了重要基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：甲殼素 組織工程 角膜上皮細胞 損傷修復
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞10-16
• 第一章 文獻綜述16-32
• 1 角膜基本結(jié)構(gòu)和功能概述16-19
• 1.1 上皮層17
• 1.2 前彈力膜17-18
• 1.3 基質(zhì)層18
• 1.4 后彈力膜18
• 1.5 內(nèi)皮層18-19
• 2 角膜病及角膜重建術(shù)19-22
• 2.1 常見角膜病19-20
• 2.1.1 角膜外傷19-20
• 2.1.2 感染性角膜炎20
• 2.1.3 其他20
• 2.2 角膜重建術(shù)20-22
• 2.2.1 治療性角膜移植術(shù)21
• 2.2.2 角膜上皮成形術(shù)和角膜緣移植術(shù)21
• 2.2.3 羊膜移植術(shù)21-22
• 2.2.4 筋膜囊成形術(shù)22
• 2.2.5 穿透角膜移植術(shù)和板層角膜移植術(shù)22
• 3 組織工程角膜研究進展22-28
• 3.1 組織工程角膜種子細胞概述23-25
• 3.1.1 干細胞誘導分化23-24
• 3.1.2 角膜上皮細胞的體外培養(yǎng)24-25
• 3.1.3 永生化角膜上皮細胞25
• 3.2 組織工程角膜支架材料概述25-28
• 3.2.1 羊膜26
• 3.2.2 膠原26-27
• 3.2.3 脫細胞角膜基質(zhì)27-28
• 3.2.4 殼聚糖及其衍生物28
• 3.2.5 人工合成材料28
• 4 甲殼素性質(zhì)及其在醫(yī)學方面的應(yīng)用28-30
• 本課題研究目的和意義30-32
• 第二章 甲殼素混合膜的制備及其理化性質(zhì)研究32-40
• 1 材料與方法32-35
• 1.1 實驗材料和試劑32
• 1.2 主要儀器32-33
• 1.3 實驗方法33-35
• 1.3.1 甲殼素純化33
• 1.3.2 甲殼素性質(zhì)測定33-34
• 1.3.3 甲殼素混合膜的制備34
• 1.3.4 甲殼素混合膜性質(zhì)測定34-35
• 2 實驗結(jié)果35-38
• 2.1 甲殼素的性質(zhì)測定35-36
• 2.1.1 甲殼素分子量35
• 2.1.2 甲殼素脫乙酰度35
• 2.1.3 甲殼素的紅外結(jié)構(gòu)表征35-36
• 2.2 混合膜性質(zhì)36-38
• 2.2.1 厚度36
• 2.2.2 含水量36
• 2.2.3 透光率36-37
• 2.2.4 機械性能37-38
• 3 討論38-39
• 4 本章小結(jié)39-40
• 第三章 甲殼素混合膜的生物相容性40-57
• 1 材料與方法40-46
• 1.1 實驗材料和試劑40-41
• 1.2 主要儀器41
• 1.3 實驗方法41-46
• 1.3.1 甲殼素混合膜對兔眼刺激反應(yīng)41-43
• 1.3.2 兔角膜緣上皮細胞的原代和傳代培養(yǎng)43
• 1.3.3 角膜緣上皮細胞在甲殼素混合膜上的生長貼附情況43-44
• 1.3.4 掃描電鏡觀察角膜緣上皮細胞在甲殼素混合膜上的生長情況44
• 1.3.5 甲殼素混合膜的體外酶解性44
• 1.3.6 甲殼素混合膜的組織相容性及體內(nèi)降解性44-46
• 2 實驗結(jié)果46-55
• 2.1 甲殼素混合膜對兔眼刺激反應(yīng)46
• 2.2 角膜緣上皮細胞的培養(yǎng)46-47
• 2.3 角膜緣上皮細胞在甲殼素混合膜上的生長貼附情況47-49
• 2.4 角膜緣上皮細胞在甲殼素混合膜上的掃描電鏡觀察49-50
• 2.5 甲殼素膜片體外降解性50
• 2.6 甲殼素混合膜的組織相容性50-55
• 2.6.1 甲殼素混合膜植入后肉眼觀察情況50-52
• 2.6.2 甲殼素混合膜植入體內(nèi)后的組織切片觀察52-55
• 3 討論55-56
• 4 本章小結(jié)56-57
• 第四章 組織工程甲殼素載體膜片對角膜上皮損傷修復作用的研究57-66
• 1 材料與方法57-60
• 1.1 實驗材料和試劑57-58
• 1.2 主要儀器58
• 1.3 實驗方法58-60
• 1.3.1 兔角膜緣上皮細胞的原代及傳代培養(yǎng)培養(yǎng)58
• 1.3.2 載細胞甲殼素混合曲率膜的制備58
• 1.3.3 載細胞混合膜對角膜上皮細胞損傷的修復作用58-60
• 2 實驗結(jié)果60-64
• 2.1 兔角膜緣上皮細胞在甲殼素混合曲率膜上的培養(yǎng)60
• 2.2 載細胞混合膜片對角膜上皮細胞損傷的修復作用60-64
• 2.2.1 術(shù)后兔眼肉眼觀察60-61
• 2.2.2 熒光染色標記觀察61-63
• 2.2.3 損傷修復后角膜上皮組織切片觀察63
• 2.2.4 損傷修復后角膜上皮掃描電鏡觀察63-64
• 3 討論64-65
• 4 本章小結(jié)65-66
• 全文總結(jié)66-67
• 參考文獻67-74
• 論文的創(chuàng)新點與不足74-75
• 致謝75
• 個人簡歷75
• 發(fā)表的學術(shù)論文75-76

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