發(fā)布時間：2017-08-04 11:18

  本文關(guān)鍵詞：絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞與PLGA構(gòu)建組織工程脂肪的實驗研究

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【摘要】：目的： 1.通過雙側(cè)卵巢摘除術(shù)構(gòu)建絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動物模型，收集OVX大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（MSCs）進行體外培養(yǎng)、擴增、成脂向誘導(dǎo)分化，探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠MSCs體外分裂增殖能力以及成脂向分化能力； 2.將成脂誘導(dǎo)后的MSCs與高分子生物支架材料PLGA體內(nèi)構(gòu)建脂肪組織工程，評價絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠MSCs作為種子細胞構(gòu)建脂肪組織工程的潛在應(yīng)用價值； 3.證明絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的相關(guān)細胞機制，為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者利用自身MSCs構(gòu)建組織工程脂肪提供實驗基礎(chǔ)和技術(shù)依據(jù)。 方法： 1.采用雙側(cè)卵巢摘除術(shù)建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動物模型，模型建立3月后，通過雙能X線吸收法對其骨密度、骨礦含量進行檢測； 2.取OVX大鼠雙側(cè)股骨、脛骨，采用貼壁篩選法體外分離培養(yǎng)MSCs，，通過不斷傳代進行擴增和純化，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化；MTT法測定細胞生長情況，繪制細胞生長曲線； 3.取OVX大鼠第3代MSCs進行成脂誘導(dǎo)，分別于第14天、21天倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，并進行油紅O染色鑒定； 4.取OVX大鼠成脂誘導(dǎo)第14天MSCs進行透射電鏡觀察，分析其超微結(jié)構(gòu)的變化； 5.將誘導(dǎo)成熟成脂細胞與PLGA支架體外共培養(yǎng)，1周后掃描電鏡觀察細胞在PLGA支架材料上的粘附、生長狀況； 6.將種子細胞—支架材料復(fù)合物植入裸鼠背部皮下進行異位成脂，于不同時間點（4周、8周、12周）取材，通過組織切片HE染色檢測植入體周圍及內(nèi)部成脂情況。 結(jié)果： 1.采用雙側(cè)卵巢摘除術(shù)建模后3月，經(jīng)DXA法檢測其骨密度與骨礦含量均顯著低于正常雌性大鼠（P0.05）； 2.選用全骨髓貼壁培養(yǎng)法，OVX大鼠MSCs在培養(yǎng)瓶中生長狀態(tài)良好，可大量增殖，呈現(xiàn)紡錘形、梭形，細胞間相互連接； 3.MTT檢測結(jié)果顯示：第1天到第2天增殖速度稍為緩慢，為潛伏期；第2天至第7天，細胞增殖速度較快，呈指數(shù)增長，進入生長期；第7天至第10天細胞增殖速度變緩，細胞生長進入平臺期； 4.經(jīng)成脂誘導(dǎo)后，細胞變?yōu)閳A形，胞漿內(nèi)被大小不一的脂滴所占據(jù)；油紅O染色，脂滴被染成深紅色，呈陽性；透射電鏡觀察成脂誘導(dǎo)后OVX大鼠MSCs體積增大，呈圓形或橢圓形，胞膜邊緣光滑，胞體內(nèi)可見大量滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、脂滴聚集； 5.取出與PLGA材料的復(fù)合植入物，HE染色可檢測出新生脂肪組織的形成。 結(jié)論： 1.經(jīng)雙側(cè)卵巢摘除術(shù)后建立的骨質(zhì)疏松大鼠模型中所獲得的骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)，采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)、純化擴增后，生長狀態(tài)良好，增殖活性高，完全可達到組織工程對種子細胞所要求的106～107數(shù)量級； 2.使用含有地塞米松、IBMX、吲哚美辛、胰島素等誘導(dǎo)劑的基礎(chǔ)培養(yǎng)基可完成對OVX大鼠MSCs的成脂向誘導(dǎo)，成脂能力確切； 3.OVX大鼠MSCs可在生物高分子材料PLGA三維空間內(nèi)很好的粘附、生長，且具有較高的細胞接種率，能夠完成與生物支架材料的復(fù)合共培養(yǎng)； 4.將細胞-支架材料復(fù)合物植入裸鼠體內(nèi)，裸鼠生長狀態(tài)良好，未見明顯異常； 5. OVX大鼠MSCs可在生物體內(nèi)繼續(xù)生長、增殖，并保持其活性，成功構(gòu)建出組織工程脂肪； 6.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥大鼠所獲得的MSCs體外生長、增殖、分化能力并沒有減弱，具有強大的增殖、分化能力，可達到組織工程對種子細胞的基本要求。
【關(guān)鍵詞】：絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥 骨髓間充質(zhì)干細胞 脂肪細胞 SD大鼠 PLGA 組織工程脂肪
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R580;R318.08
【目錄】：

• 英文縮寫詞表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 實驗一 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動物模型建立的實驗研究15-18
• 1 材料與方法15
• 2 結(jié)果15-16
• 3 討論16-18
• 實驗二 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)及成脂分化能力的實驗研究18-26
• 1 材料與方法18-21
• 2 結(jié)果21-22
• 3 討論22-24
• 4 附圖24-26
• 實驗三 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞源性的脂肪細胞與 PLGA 構(gòu)建組織工程脂肪的實驗研究26-32
• 1 材料與方法26-28
• 2 結(jié)果28
• 3 討論28-30
• 4 附圖30-32
• 小結(jié)32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-43
• 參考文獻41-43
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況43-44
• 致謝44-45
• 個人簡介45

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本文編號：619260