本文關鍵詞：組織工程氣管種子細胞的實驗研究

  更多相關文章： 組織工程氣管 種子細胞 細胞片 UpCell培養(yǎng)皿 骨髓間充質干細胞

【摘要】：目的： 一、體外構建氣管黏膜上皮細胞片,探討氣管黏膜上皮細胞的增殖特性,為構建組織工程氣管提供技術支持。 二、體外分離培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞(BMSCs),對其鑒定并行功能分析。 三、通過比較不同的骨髓間充質干細胞培養(yǎng)方法,尋求適宜的兔骨髓間充質干細胞培養(yǎng)方式,為構建組織工程氣管提供技術支持。 方法： 一、兔氣管黏膜上皮細胞片的制備 1、利用組織塊法體外培養(yǎng)兔氣管黏膜原代上皮細胞并傳代培養(yǎng)； 2、通過免疫細胞組織化學、免疫熒光檢測對已獲得的氣管黏膜原代上皮細胞行CK-18檢測,并進行鑒定； 3、將第2代上皮細胞種植于96孔板內,分別于6、12、24、36、48、60、72、84、96、108h取出,用MTT法測定細胞增殖活性； 7、利用UpCell細胞培養(yǎng)皿制作氣管黏膜上皮細胞片,并對其進行分析鑒定。 二、兔骨髓間充質干細胞培養(yǎng)方法的比較 1、分別利用全貼壁篩選培養(yǎng)法、半全紅細胞裂解液培養(yǎng)法、完全紅細胞裂解液培養(yǎng)法、Ficoll密度梯度離心法體外獲取兔骨髓間充質干細胞； 2、對四種方法所獲得的兔骨髓間充質干細胞分別行細胞增殖能力分析及細胞表面標志物檢測： 3、通過形態(tài)學觀察、HE染色、細胞免疫熒光檢測及流式細胞儀分析對所培養(yǎng)的兔骨髓間充質干細胞進行鑒定。 結果： 一、兔氣管黏膜原代上皮細胞片的制備 1、通過組織塊法可獲得兔氣管黏膜上皮細胞,行CK-18檢測分析,細胞呈陽性表達； 2、對第2代兔氣管黏膜上皮細胞行生長曲線分析,發(fā)現其生長曲線類“S”型,符合上皮細胞的增殖規(guī)律； 3、通過UpCell細胞培養(yǎng)皿可成功的制備出上皮細胞片,顯微鏡下可觀察到細胞致密,呈現不規(guī)則形態(tài),和一定的厚度。 二、兔骨髓間充質干細胞培養(yǎng)方法的比較 1、全貼壁篩選培養(yǎng)法、半全紅細胞裂解液培養(yǎng)法、完全紅細胞裂解液培養(yǎng)法、Ficoll密度梯度離心法四種方法均可獲取兔骨髓間充質干細胞； 2、對四種方法獲得的兔骨髓間充質干細胞分別行細胞增殖能力分析發(fā)現全貼壁篩選培養(yǎng)法是最優(yōu)的培養(yǎng)方式,且其四種方法所獲取的細胞行流式細胞儀分析細胞表面標志物未發(fā)現明顯差異； 3、對所獲取的細胞行形態(tài)學觀察、細胞免疫熒光檢測、流式細胞儀分析發(fā)現所培養(yǎng)細胞的特性符合骨髓間充質干細胞的特性。 結論： 1、本實驗通過組織塊法體外培養(yǎng)了兔氣管黏膜原代上皮細胞,并運用UpCell細胞培養(yǎng)皿成功制備出了氣管黏膜上皮細胞片； 2、全貼壁篩選培養(yǎng)法、半全紅細胞裂解液培養(yǎng)法、完全紅細胞裂解液培養(yǎng)法以及Ficoll密度梯度離心法均能成功的分離培養(yǎng)出骨髓間充質干細胞； 3、通過對四種骨髓間充質干細胞的常見培養(yǎng)方法的比較發(fā)現全骨髓貼壁篩選法是最適宜的培養(yǎng)方式,其獲得的骨髓間充質干細胞與其他三種細胞培養(yǎng)方式獲取的細胞在形態(tài)學、表面免疫標志物、增殖特性等方面未見明顯的差異； 4、兔氣管黏膜上皮細胞片及骨髓間充質干細胞的成功制備為組織工程氣管的構建提供了新的思路和基礎技術支持。
【關鍵詞】：組織工程氣管 種子細胞 細胞片 UpCell培養(yǎng)皿 骨髓間充質干細胞
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.13
【目錄】：

• 課題科研基金資助2-3
• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符號說明10-11
• 前言11-13
• 第一部分 兔氣管黏膜上皮細胞片的制備13-24
• 引言13-14
• 1、材料和試劑配制14-15
• 2 方法15-18
• 3 結果18-19
• 4 討論19-21
• 5 參考文獻21-24
• 第二部分 兔骨髓間充質干細胞培養(yǎng)方法的比較24-33
• 引言24-25
• 1、材料和試劑配制25-26
• 2 方法26-28
• 3 結果28-29
• 4 討論29-30
• 5 參考文獻30-33
• 實驗結論33-34
• 附圖34-43
• 文獻綜述43-52
• 參考文獻49-52
• 論著一52-68
• 論著二68-78
• 致謝78-79
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄79-81

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

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本文編號：597991