發(fā)布時間：2017-07-25 20:20

  本文關(guān)鍵詞：脂肪干細(xì)胞用于組織工程血管構(gòu)建的細(xì)胞分化研究

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【摘要】：血管移植是目前臨床上治療動脈粥樣硬化等血管類疾病的主要手段,一般選用內(nèi)乳動脈或自體大隱靜脈作為材料,但可以移植的自體血管數(shù)目有限,并且很大一部分患者不適合進(jìn)行自體血管移植。人工合成血管如滌綸和聚四氟乙烯在大中直徑血管(內(nèi)徑5mmm)移植中已獲得成功,但在小直徑血管(內(nèi)徑5mm)移植中因其高剪切力和低血流量,容易形成血栓和內(nèi)膜增生,遠(yuǎn)期通暢率低,且無降解性和促進(jìn)組織再生的能力,長期移植生物相容性很差等問題。近年來,組織工程學(xué)的發(fā)展為研究可降解、生物相容性良好的小直徑血管支架提供了新途徑。 脂肪干細(xì)胞(ADSC)的分化潛能和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)類似,能在體外培養(yǎng)中分化為多種中胚層來源的細(xì)胞,如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等。脂肪干細(xì)胞具有取材容易,可以通過抽脂法獲得,創(chuàng)傷小而且供應(yīng)充足,能反復(fù)取材,也不會引起道德爭論。并且,脂肪干細(xì)胞具有增殖快速的優(yōu)點(diǎn),因此作為組織工程種子細(xì)胞具有非常大的優(yōu)勢,應(yīng)用前景廣闊。 本研究利用脂肪干細(xì)胞的多向分化性能,原位轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)其在不同基因誘導(dǎo)條件下分別向血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分化。我們選用了明膠制作二維膜,利用PEI作為轉(zhuǎn)染載體,制成了具有高轉(zhuǎn)染效率的組織工程支架。VEGF質(zhì)�；罨笳T導(dǎo)ADSC向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化；PDGF質(zhì)�；罨蟮闹Ъ芸烧T導(dǎo)ADSC向血管平滑肌細(xì)胞分化。通過觀察細(xì)胞在支架上的生長狀態(tài),ELISA檢測因子表達(dá),Q-PCR檢測血管細(xì)胞標(biāo)志性物的表達(dá),來判斷ADSC在支架上生長和分化。 細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示基因活化材料能夠很好支持ADSC的貼附和增殖；VEGF-165因子的ELISA測定結(jié)果顯示該系統(tǒng)是一個理想的的原位轉(zhuǎn)染系統(tǒng),為誘導(dǎo)ADSC向血管細(xì)胞分化提供了細(xì)胞因子的保障。相比未基因活化的支架,Q-PCR結(jié)果顯示在向血管內(nèi)皮分化體系中,誘導(dǎo)后的ADSC血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志分子CD31和Vwf的mRNA表達(dá)量明顯上調(diào)。在向血管平滑肌分化體系中,血管平滑肌細(xì)胞標(biāo)志分子cnnl和α-SMA的mRNA表達(dá)量也顯著上調(diào)。 本研究初步確定了在合適的誘導(dǎo)條件下,ADSC可分別向血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分化；為取材方便且應(yīng)用前景廣闊ADSC應(yīng)用于血管組織工程提供了充分的實驗證據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：血管組織工程 脂肪干細(xì)胞 基因活性材料 原位轉(zhuǎn)染 誘導(dǎo)分化
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮寫詞表10-11
• 第一章 綜述11-30
• 1.1 組織工程11-15
• 1.1.1 組織工程的定義11
• 1.1.2 組織工程的要素11-15
• 1.2 干細(xì)胞治療15-18
• 1.2.1 干細(xì)胞的定義及研究歷史15-16
• 1.2.2 干細(xì)胞的分類16-18
• 1.3 組織工程血管研究進(jìn)展18-23
• 1.3.1 血管組織工程的種子細(xì)胞19-22
• 1.3.2 干細(xì)胞在血管組織工程中的應(yīng)用22-23
• 1.4 基因傳輸技術(shù)23-25
• 參考文獻(xiàn)25-30
• 第二章 原位轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞體系的構(gòu)建30-37
• 2.1 實驗材料和儀器30
• 2.2 實驗方法30-33
• 2.2.1 質(zhì)粒DNA的擴(kuò)增與純化30-31
• 2.2.2 明膠膜支架的構(gòu)建31-32
• 2.2.3 原代大鼠脂肪干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)32
• 2.2.4 ADSCs在二維明膠膜上生長曲線32-33
• 2.2.5 ADSCs在二維明膠膜上原位轉(zhuǎn)染33
• 2.3 實驗結(jié)果33-35
• 2.3.1 原代培養(yǎng)細(xì)胞圖片結(jié)果33-34
• 2.3.2 細(xì)胞計數(shù)結(jié)果34
• 2.3.3 明膠膜原位轉(zhuǎn)染結(jié)果34-35
• 2.4 討論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-37
• 第三章 VEGE/PDGF誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞向血管組成細(xì)胞分化37-47
• 3.1 實驗材料37
• 3.2 實驗方法37-40
• 3.2.1 VEGF-165基因活化的明膠材料制備37-38
• 3.2.2 基因活化的明膠材料中VEGF-165的表達(dá)38-39
• 3.2.3 real-time PCR檢測基因活化材料上ADSC向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)39-40
• 3.3 實驗結(jié)果40-44
• 3.3.1 基因活化的明膠材料中VEGF-165的表達(dá)40-41
• 3.3.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因的mRNA水平的表達(dá)41-43
• 3.3.3 血管平滑肌細(xì)胞相關(guān)基因的mRNA水平的表達(dá)43-44
• 3.4 討論44-46
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 致謝47-48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 沈彬,段宏,陳堅,楊靜,裴福興;bFGF緩釋微球的制備及其促雪旺細(xì)胞分裂增殖的初步研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年04期

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本文編號：573093