本文關(guān)鍵詞：采用混合陽離子交聯(lián)劑制備甲基丙烯酸海藻酸鹽凝膠小球及其對軟骨細胞增殖影響的研究

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【摘要】：本研究旨在探索一種適合軟骨細胞增殖的三維培養(yǎng)載體,從而更好地應(yīng)用于軟骨組織工程領(lǐng)域。方法：1)采用Ca2+:Ba2+=5:5作為陽離子交聯(lián)劑,與甲基丙烯酸藻酸鹽(MA)混合,利用光反應(yīng)制備凝膠小球。以藻酸鈣做對照組,測定其滲透性和壓縮模量。2)分離兔膝關(guān)節(jié)軟骨細胞的、并體外培養(yǎng)。當(dāng)軟骨細胞貼壁后長至70-80%時用EDTA-胰酶消化傳代至P1代。3)將甲基丙烯酸海藻酸鹽和P1代軟骨細胞復(fù)合后與Ca2+:Ba2+=5:5(?)昆合陽離子交聯(lián)制備凝膠小球,并對軟骨細胞體外三維培養(yǎng)進行表征。以藻酸鈣做對照組,在不同時間點進行倒置顯微鏡下觀察、組織學(xué)檢測、掃描電鏡下觀察、細胞活性及增殖的檢測、軟骨細胞分泌細胞外基質(zhì)檢測,并用II型膠原免疫組化染色對其表型進行鑒定。結(jié)果：1)通過光交聯(lián)反應(yīng)成功制備出MA凝膠小球,該凝膠的壓縮模量明顯高于藻酸鈣對照組,凝膠小球的滲透性與對照組無顯著差異。說明該凝膠小球強度有所提高,但滲透性并沒有明顯下降。2)從兔膝關(guān)節(jié)軟骨中成功分離出軟骨,培養(yǎng)出原代軟骨細胞并傳代至P1代。3)將軟骨細胞包裹進甲基丙烯酸海藻酸鹽凝膠小球和藻酸鈣小球并進行三維培養(yǎng),倒置顯微鏡下發(fā)現(xiàn),隨著時間的推移,兩組小球內(nèi)的軟骨細胞不斷增殖,第14天開始出現(xiàn)細胞簇,在第21天可以觀察到MA凝膠小球內(nèi)的細胞簇較藻酸鈣組更多；第21天掃描電鏡下可以觀察到兩組凝膠小球內(nèi)軟骨細胞均貼附在支架表面生長,軟骨細胞呈圓形；組織學(xué)染色顯示,兩組凝膠小球內(nèi)軟骨細胞均勻分布在小球中,細胞不斷增殖并逐漸成細胞簇,MA凝膠小球組細胞簇聚集更明顯；免疫組化染色顯示第21天MA組II型膠原免疫組化染色呈陽性；Alamar blue法測定細胞增殖結(jié)果顯示在培養(yǎng)的21天內(nèi),兩組小球內(nèi)軟骨細胞不斷增殖,MA凝膠小球組細胞增殖比藻酸鈣組更加明顯,兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異；細胞外基質(zhì)GAG含量的測定結(jié)果顯示在培養(yǎng)的21天內(nèi)兩組凝膠小球內(nèi)軟骨細胞分泌的GAG不斷增加,第21天MA凝膠小球組GAG含量明顯高于藻酸鈣組,具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論：以混合陽離子作為交聯(lián)劑與甲基丙烯酸海藻酸鹽通過光反應(yīng)制備的三維培養(yǎng)載體更適合軟骨細胞三維培養(yǎng)。
【關(guān)鍵詞】：甲基丙烯酸海藻酸鹽 光交聯(lián)反應(yīng) 三維培養(yǎng) 陽離子交聯(lián)劑 凝膠小球 軟骨細胞
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 前言8-10
• 文獻回顧10-13
• 第一部分 光交聯(lián)反應(yīng)制備混合陽離子交聯(lián)劑甲基丙烯酸海藻酸鹽微球及其性能研究13-20
• 1.1 實驗材料及溶液配制13-14
• 1.2 實驗方法14-16
• 1.3 結(jié)果16-18
• 1.4 討論18-20
• 第二部分 混合陽離子交聯(lián)劑甲基丙烯酸海藻酸鹽三維培養(yǎng)軟骨細胞的實驗研究20-31
• 2.1 實驗材料及溶液配制20-21
• 2.2 實驗方法21-22
• 2.3 實驗觀察22-23
• 2.4 結(jié)果23-29
• 2.5 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-36
• 在學(xué)期間的研究成果36-37
• 致謝37-38
• 附錄一 中英文縮略詞38

【參考文獻】

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本文編號：558570