本文關(guān)鍵詞：人咽縮肌細胞體外培養(yǎng)及下咽生物支架的構(gòu)建

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【摘要】：下咽亦稱喉咽，在人體生理解剖中處于要塞位置，向前經(jīng)喉入口，向下連接食管。下咽癌是一種常見的頭頸部惡性腫瘤，體外培養(yǎng)人咽縮肌細胞并構(gòu)建仿生的下咽生物支架是未來治療下咽癌的重要方法之一。通過體外構(gòu)建人工下咽肌組織生物支架及動物實驗，可以為修復(fù)下咽部缺損肌組織提供新思路，這是臨床與組織工程領(lǐng)域的研究熱點。支架材料的優(yōu)劣直接影響體外培養(yǎng)人咽縮肌的形態(tài)及功能，關(guān)系到整個生物支架的構(gòu)建。本課題組以聚氨酯（PEU）為基材，利用二元胺胺解交聯(lián)劑固定接枝生物大分子和大分子層層自組裝的技術(shù)，促進高分子材料的組織和細胞相容性,，構(gòu)建了下咽肌組織工程支架。課題分三部分： 第一部分，人咽縮肌細胞的體外提純、培養(yǎng)、增殖。由于咽縮肌位于提咽肌和腭帆肌內(nèi)側(cè)，單純分離咽縮肌極其困難。咽縮肌屬于骨骼肌，在分離骨骼肌時必然摻雜著成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、血管內(nèi)皮細胞等其他成分的細胞，對于獲得一定數(shù)量且具有體外成活能力的咽縮肌細胞絕非易事。我們采用組織塊培養(yǎng)法，，可獲得純凈的細胞。在顯微鏡下，可觀察到單個肌細胞增殖分化至多核肌管的過程，起初是大量紡錘形的單核細胞在組織塊周圍出現(xiàn)，達到一定數(shù)量后相互融合，隨著細胞進入分化階段則融合成肌管，最終形成具有方向性的功能組織。第二部分，以PEU為基本材料構(gòu)建平面及立體生物支架。利用二元胺胺解交聯(lián)劑固定接枝生物大分子和大分子層層自組裝的技術(shù)，通過接枝絲素蛋白（SF），制備PEU、PEU-SF兩組支架，并對支架進行物理性能的檢測，包括接觸角檢測及力學(xué)性能分析。用掃描電鏡（SEM）觀察支架表面的微結(jié)構(gòu)，使用倒置相差顯微鏡，免疫熒光觀察、鑒定細胞的性狀以及細胞增殖、分化和成肌的狀況，并比較接枝前后咽縮肌細胞和支架相容性的變化。證實接枝絲素蛋白提高了生物支架的細胞相容性和組織相容性，咽縮肌細胞在PEU-SF支架上形成肌管的數(shù)量遠超PEU支架，且能形成多層立體結(jié)構(gòu)。第三部分，進行動物實驗。將生物支架植入裸鼠體內(nèi)，觀察生物支架的降解情況，證實了PEU具有良好的生物降解速率。接枝SF的PEU支架與未接枝相比具有更好的組織相容性，提高了支架植入體內(nèi)的成功率，降低了排異反應(yīng)。研究表明，組織塊培養(yǎng)法獲得的咽縮肌細胞與接枝絲素蛋白的立體凹槽PEU支架復(fù)合培養(yǎng)時其生長狀況佳，這為體外構(gòu)建下咽組織瓣提供了一定的條件。
【關(guān)鍵詞】：人咽縮肌 體外培養(yǎng) 生物支架 表面改性 下咽組織工程
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8
• 1 研究背景8-14
• 1.1 組織工程進展8-10
• 1.1.1 組織工程再生醫(yī)學(xué)的優(yōu)點9-10
• 1.2 咽縮肌組織工程10-11
• 1.3 生物材料的研究11-12
• 1.4 構(gòu)建生物支架具備三大要素12-13
• 1.5 研究課題的提出13-14
• 2 人咽縮肌細胞體外培養(yǎng)14-16
• 2.1 引言14-15
• 2.2 材料與儀器15
• 2.2.1 實驗試劑15
• 2.2.2 實驗儀器及材料15
• 2.3 實驗方法15
• 2.4 實驗結(jié)果與討論15-16
• 2.5 小結(jié)16
• 3 聚氨酯支架的制備、改性及其細胞相容性研究16-24
• 3.1 引言16-17
• 3.2 材料及儀器17-18
• 3.2.1 實驗材料17-18
• 3.2.2 實驗儀器18
• 3.3 實驗方法18-19
• 3.3.1 支架的改性19
• 3.3.2 支架的細胞相容性研究19
• 3.4 結(jié)果與討論19-23
• 3.4.1 支架的機械性能19-20
• 3.4.2 細胞和支架的親和性20-21
• 3.4.3 免疫熒光檢測接枝不同細胞活性因子后肌組織中MyoD 表達21-22
• 3.4.4 電鏡觀察咽上縮肌細胞和 PU 支架22-23
• 3.5 小結(jié)23-24
• 4 動物實驗24-25
• 4.1 引言24
• 4.2 實驗方法24
• 4.3 實驗結(jié)果與討論24-25
• 4.4 小結(jié)25
• 5 結(jié)論與展望25-26
• 5.1 結(jié)論25-26
• 5.2 展望26
• 參考文獻26-30
• 附錄A 綜述30-39
• 參考文獻37-39
• 在學(xué)研究成果39-40
• 致謝40

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：541864