本文關(guān)鍵詞：脫細(xì)胞真皮基質(zhì)軟組織增量效果及轉(zhuǎn)歸的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：近年來,隨著生物材料的發(fā)展,口腔頜面部軟組織填充術(shù)也得到了迅速的發(fā)展。軟組織填充術(shù)因為能用于解決口腔頜面部組織凹陷、不對稱等問題而廣泛應(yīng)用于臨床,尋找一種理想的軟組織填充材料具有重要的臨床意義。面部軟組織填充材料的應(yīng)用已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的一項熱門課題。目前的軟組織填充材料有多種多樣,在美容外科領(lǐng)域的軟組織填充材料也不斷有新的發(fā)展。在眾多的材料中,可注射型的填充材料因為其微創(chuàng)、操作簡便等特點更倍受青睞,是未來研究發(fā)展的方向。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)作為近年來國內(nèi)外新興起的一種組織替代物,是通過各種脫細(xì)胞技術(shù)處理后獲得的異種基質(zhì)材料或者異體基質(zhì)材料,去除了材料的細(xì)胞抗原免疫活性但卻保留著正常膠原的三維結(jié)構(gòu)和真皮中含膠原支架的細(xì)胞外基質(zhì),能為組織細(xì)胞的再生提供一個良好的支架。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)最開始被應(yīng)用于燒傷整形外科及口腔頜面外科治療中,表現(xiàn)出了良好的臨床效果�；诓牧狭己玫纳锵嗳菪�,國內(nèi)外有學(xué)者開始嘗試將脫細(xì)胞真皮基質(zhì)作為軟組織填充材料應(yīng)用于美容外科中,以修復(fù)口腔頜面部的軟組織缺損、唇部美容、眼周部填充、鼻唇溝填充等。因此,本課題組通過初步顆�；瑺蠲摷�(xì)胞真皮基質(zhì)后,分別將顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠作為軟組織填充材料,在動物體內(nèi)建立軟組織增量模型,探究顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)與片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的組織增量效果和轉(zhuǎn)歸機制,為進(jìn)一步細(xì)化顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)乃至制成注射型的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)打下基礎(chǔ),以期為臨床提供更理想的軟組織填充材料。目的：本實驗將顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠作為軟組織填充材料,通過在動物體內(nèi)建立軟組織增量模型,從組織增量的體積和高度來初步探究3種不同材料的組織增量效果；初步研究填充材料的轉(zhuǎn)歸機制;以探討進(jìn)一步細(xì)化顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)乃至制成注射型的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的可行性。方法：1.在兔耳上分別注射透明質(zhì)酸鈉凝膠0.05 ml、0.10 ml、0.15 ml,每組6個樣本,用三維輪廓掃描儀掃描建模后測量注射區(qū)軟組織增量的體積；在-20℃環(huán)境中使用OCT包埋劑包埋標(biāo)本,切片直至達(dá)到兔耳注射區(qū)最高點,并在注射區(qū)的矢狀剖面上使用游標(biāo)卡尺測量記錄注射區(qū)域組織的高度。2.大小約1.0cm×1.0cm×1mm的片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(海奧口腔修復(fù)膜)修剪成1mm×1mm×1mm大小的顆粒狀,在兔耳移植區(qū)域作一長約1.0 cm的橫行切口,在兔耳表皮與軟骨之間潛行分離出一個大小約為1.0 cm×1.0cm的皮下袋,在兔耳上移植經(jīng)生理鹽水液化的顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì),記錄為顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細(xì)胞組真皮基質(zhì)組,分別在移植后1周、2周、1月、3月、6月、9月收獲標(biāo)本,每組每個時間段6個樣本；在兔耳上注射透明質(zhì)酸鈉凝膠(潤百顏)0.10ml,記錄為透明質(zhì)酸鈉凝膠組,在術(shù)后的1周、2周、1月、3月、6月收獲標(biāo)本,透明質(zhì)酸鈉凝膠組每個時間段6個樣本；在6只兔耳中選擇6個空白區(qū)域,作為空白組。3個處理組的所有兔耳標(biāo)本采用三維輪廓掃描儀掃描建模后測量移植區(qū)軟組織增量的體積。3個處理組每個時間點隨機選擇4個標(biāo)本進(jìn)行Micro-CT掃描,進(jìn)行三維重建后測量移植區(qū)軟組織增量的體積。使用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件比較分析不同處理組(顆粒狀脫細(xì)胞真皮組、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組)在移植后不同時間段移植區(qū)域軟組織增量體積。3.在兔耳上獲得的所有標(biāo)本采用4%多聚甲醛液固定,EDTA脫鈣液脫鈣后常規(guī)脫水包埋、切片,行HE染色、Masson染色、天狼星紅染色。HE染色切片在普通光學(xué)顯微鏡下觀察移植區(qū)域的組織形態(tài)并使用Image-pro plus 6.0測量移植區(qū)域的組織高度。天狼星紅染色切片在偏振光顯微鏡下觀察膠原分布情況,并使用Image-pro plus 6.0分析測量移植區(qū)域Ⅰ/Ⅲ型膠原比例(紅色和綠色在同一圖片中所占面積的比值)。結(jié)果：1.注射量0.05 ml、0.10 ml.0.15 ml的樣本軟組織增量體積分別為(57.277±9.772) mm3、(106.785±10.568) mm3、(129.686±28.896) mm3,3組注射區(qū)域的組織增量分別與各自的注射量體積相互比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.1280.05；P=0.1770.05；P=0.1460.05)。移植區(qū)域組織高度分別為(2.300±0.182) mm、(2.797±0.279) mm、(2.890±0.411) mm.0.05 ml組的組織高度低于0.10 ml組和0.15ml組(P=0.0010.05；P=0.0000.05),注射量由0.05 ml增加到0.10ml時,組織高度隨注射量的增加而增加：0.10ml組與0.15ml組相互比較,顯示組織增量的高度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=-0.4410.05),提示注射量由0.10ml增加到0.15ml時,組織增量高度并沒有發(fā)生明顯變化。2.顆粒狀、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組在各個時間段的兔耳移植術(shù)區(qū)均未見明顯感染、壞死,各個實驗動物術(shù)后一般情況良好,飲食、排便等活動正常,未見明顯不適。顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)移植組、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)移植組在術(shù)后9月移植區(qū)域軟組織增量效果不明顯,三維輪廓掃描儀和Micro-CT掃描儀無法獲得該區(qū)域軟組織增量。三維輪廓掃描儀和Micro-CT掃描儀兩種不同的測量手段得到的各處理組在1周、2周、1月、3月、6月組織增量體積結(jié)果基本一致,3種填充材料均具有組織增量效果。在總體上看,隨著移植時間增加,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠組移植區(qū)域的組織增量體積呈遞減趨勢,且在最初的1個月內(nèi)遞減速度較快,3～6個月期間遞減趨緩。顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組與片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組的組織增量體積均值在移植術(shù)后的各個時間點相接近；透明質(zhì)酸鈉凝膠組的組織增量體積均值在各個時間點均小于顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組。組織增量體積統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果：三維輪廓掃描儀和Micro-CT掃描儀測量所得的組織體積結(jié)果分別經(jīng)過析因方差分析,都只需分別分析不同時間和不同移植處理手段的主效應(yīng),不需分析兩者交互效應(yīng)。同一處理因素不同水平之間以及同一水平不同處理因素之間的比較使用單因素方差分析。進(jìn)行后續(xù)性兩兩比較方差齊時使用LSD檢驗,方差不齊時使用Tamhane檢驗。在3個處理組中,6月移植區(qū)域組織體積分別與各自處理組中1周、2周、1月、3月的組織體積作進(jìn)一步兩兩比較。三維輪廓掃描儀測量和Micro-CT掃描儀測量結(jié)果分析,在透明質(zhì)酸鈉凝膠組中(P=0.0050.05,P=0.0420.05),6月與3月移植區(qū)域組織體積的差異有統(tǒng)計學(xué)意義；在顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組中(P=0.4150.05,P=0.2270.05)和在片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組中(P=0.1860.05,P=0.1700.05),6月與3月移植區(qū)域組織體積的差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義。同一水平不同處理因素之間單因素方差分析。三維輪廓掃描儀測量和Micro-CT掃描儀測量結(jié)果分析,在移植后2周,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.0020.05；P=0.0050.05)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.0010.05；P=0.0120.05)的組織增量體積均大于透明質(zhì)酸鈉凝膠組。3.HE染色結(jié)果：在移植后的1周和2周,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組中大量的紅細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤,有功能活躍的成纖維細(xì)胞長入移植區(qū)域內(nèi)。在移植后期顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組中原有的填充材料隨著時間逐漸吸收完全,移植區(qū)域組織改建成與宿主周圍組織一致的結(jié)構(gòu)。在透明質(zhì)酸鈉凝膠組中,填充材料和新生的纖維形成暫時的支架,供細(xì)胞爬行生長,隨著時間延長,支架結(jié)構(gòu)逐漸崩解。Masson染色結(jié)果：顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠組在移植區(qū)域均可見新生纖維長入,并且隨著移植時間的推移,纖維數(shù)量增加。在顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組中,新生的纖維主要是逐漸包繞、替代填充物,早期的纖維排列較為紊亂,后期纖維排列結(jié)構(gòu)整齊、致密；在透明質(zhì)酸鈉凝膠組,新生的纖維長入,形成支架供細(xì)胞爬行生長,隨著時間推移,纖維支架結(jié)構(gòu)逐漸崩解。天狼星紅染色結(jié)果：偏振光顯微鏡下,Ⅰ型膠原纖維呈紅色、橙黃色或黃色；Ⅲ型膠原纖維呈綠色,非膠原纖維處呈黑色。各個處理組切片視野中紅黃色面積與綠色面積隨著時間發(fā)生規(guī)律性變化。顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組,在移植術(shù)后的早期,綠色的Ⅲ型膠原纖維逐漸增多,Ⅲ型膠原纖維主要分布在填充材料的顆粒與顆粒之間,從微粒四周向中央長入,隨后Ⅲ型膠原纖維開始減少,紅色的Ⅰ型膠原纖維數(shù)量增多,在6月和9月時移植區(qū)域內(nèi)紅色的Ⅰ型膠原纖維為主要的膠原纖維,膠原纖維與兔耳周圍組織的纖維排列方式相似。在片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組,在移植術(shù)后的早期,綠色的Ⅲ型膠原纖維最開始主要分布于片狀填充材料的外周,在填充材料的兔耳移植區(qū)域剝離的基底面向表皮面長入,隨著時間的推移,綠色的Ⅲ型膠原纖維逐漸被紅色的Ⅰ型膠原纖維所替代。透明質(zhì)酸鈉凝膠組,在早期,新生的綠色Ⅲ型膠原纖維形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),移植時間延長,紅色的Ⅰ型膠原纖維從網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的四周向中央逐漸增多,替代綠色的Ⅲ型膠原纖維。Ⅰ/Ⅲ型膠原比例變化結(jié)果：3種填充材料Ⅰ/Ⅲ型膠原比例在移植術(shù)后呈先下降后上升的趨勢,在移植術(shù)后2周Ⅰ/Ⅲ型膠原比例出現(xiàn)了最低點,在6月和9月Ⅰ/Ⅲ型膠原比例基本趨于穩(wěn)定,與正常的兔耳組織Ⅰ/Ⅲ型膠原比例相接近。移植區(qū)域膠原亞型在不同時間的規(guī)律變化符合機體創(chuàng)傷愈合膠原變化過程。Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比較的統(tǒng)計學(xué)結(jié)果：在6月,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.4550.05),片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.6880.05),透明質(zhì)酸鈉凝膠組(P=0.3390.05),與空白組Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在移植術(shù)后的9月,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.3300.05),片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.1480.05),與空白組Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。移植區(qū)域組織高度結(jié)果：從總體上看,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組移植區(qū)域組織高度呈遞減趨勢,在最初的1個月內(nèi)遞減速度較快,隨后高度變化趨緩,在6月、9月時組織高度逐漸與空白組接近。與移植區(qū)域組織增量體積不同,在經(jīng)歷了高度變化較大的移植早期(1個月)后,透明質(zhì)酸鈉凝膠組移植區(qū)域組織高度均值高于顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)。在移植術(shù)后的6月,片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.0560.05),與空白組兔耳軟骨上組織的厚度比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在移植術(shù)后的9月,顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=-0.7900.05),片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)組(P=0.7760.05),與空白組Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比兔耳軟骨上組織的厚度比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：1.應(yīng)用兔耳作為注射型軟組織填充材料研究動物模型時,0.05-0.10 ml是一個適當(dāng)?shù)淖⑸淞糠秶?.顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠作為軟組織填充材料時,從移植區(qū)域組織的增量體積和高度來評價材料組織增量效果的顯著性和穩(wěn)定性時,3組材料均具有良好的組織增量效果。片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)通過初步顆�；�,制作成大小約為1 mm×1 mm×1 mm的顆粒狀時,在移植術(shù)后的9個月內(nèi),顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的組織增量效果能夠取得與片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)移植相似的增量效果；在移植術(shù)后組織增量體積的穩(wěn)定性方面優(yōu)于透明質(zhì)酸鈉凝膠。進(jìn)一步細(xì)化顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)乃至制成注射型的脫細(xì)胞真皮基質(zhì),以期制作出更為理想的填充材料具有一定的可行性。3.顆粒狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)作為填充材料移植于兔耳后,根據(jù)組織學(xué)上的變化,提示脫細(xì)胞真皮基質(zhì)無論是通過片狀還是制作成1mm×1mm×1mm的顆粒狀植入,脫細(xì)胞真皮基質(zhì)在被逐漸吸收的同時,宿主的新生纖維組織通過不同的方向長入、替代原有的填充材料,新生的膠原纖維成分逐漸成熟,排列結(jié)構(gòu)變得整齊致密,最終移植區(qū)域組織都改建成與宿主周圍組織相一致的結(jié)構(gòu)。
【關(guān)鍵詞】：軟組織增量 脫細(xì)胞真皮基質(zhì) 透明質(zhì)酸鈉凝膠 三維重建
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.1
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-20
• 前言20-23
• 第一章 凝膠注射于兔耳行軟組織增量的效果評價23-31
• 1 引言23
• 2 材料與方法23-26
• 3 結(jié)果26-27
• 4 討論27-30
• 5 小結(jié)30-31
• 第二章 顆粒狀與片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)應(yīng)用于軟組織增量動物模型的建立31-47
• 1 引言31
• 2 材料與方法31-36
• 3 結(jié)果36-43
• 4 討論43-46
• 5 小結(jié)46-47
• 第三章 顆粒狀與片狀脫細(xì)胞真皮基質(zhì)應(yīng)用于兔耳行軟組織增量的組織學(xué)轉(zhuǎn)歸47-69
• 1 引言47
• 2 材料與方法47-53
• 3 結(jié)果53-64
• 4 討論64-68
• 5 小結(jié)68-69
• 全文總結(jié)69-70
• 參考文獻(xiàn)70-76
• 攻讀學(xué)位期間成果76-77
• 致謝77-78

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2 鞏柯;高性能脫細(xì)胞真皮基質(zhì)抗菌敷料的制備與性能研究[D];山東大學(xué);2014年

3 許聰;納米銀/脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備及抗菌性能評價[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

4 金鑫;異種和異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)修復(fù)頰部軟組織缺損的療效觀察[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

5 周曉萍;異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)在口腔頜面外科的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2005年

6 姚明;異種生物衍生材料（羊脫細(xì)胞真皮基質(zhì)）的初步研究[D];寧夏醫(yī)學(xué)院;2006年

7 劉道峰;脫細(xì)胞真皮基質(zhì)生物學(xué)轉(zhuǎn)歸初步研究[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2008年

8 苗青;層粘連蛋白增強脫細(xì)胞真皮基質(zhì)支架上骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞粘附力的實驗研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2014年

9 曾逃方;激光微孔豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的生物相容性檢測及其移植實驗[D];南昌大學(xué);2012年

10 劉述華;異種（牛）脫細(xì)胞真皮基質(zhì)修復(fù)下咽癌切除術(shù)后缺損的臨床研究[D];中南大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：脫細(xì)胞真皮基質(zhì)軟組織增量效果及轉(zhuǎn)歸的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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