本文關(guān)鍵詞：超分子聚合物水凝膠角膜基質(zhì)替代物體內(nèi)體外生物相容性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、體外構(gòu)建超分子聚合物水凝膠,檢測(cè)其生物性能和機(jī)械性能。2、通過研究超分子聚合物水凝膠在生物體內(nèi)外的相容性,探討其作為角膜基質(zhì)替代物材料的可行性,為超分子聚合物水凝膠角膜基質(zhì)替代物的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法:一、體外生物相容性實(shí)驗(yàn)研究1.兔角膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定。2.將兔角膜上皮細(xì)胞接種到超分子聚合物(PNAGA)水凝膠上,顯微鏡下觀察角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并利用LIVE-DEAD細(xì)胞活性毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性。二、體內(nèi)生物相容性實(shí)驗(yàn)研究1.將PNAGA水凝膠移植到活體兔軟骨中,12周后處死兔子,取兔子軟骨做蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin staining;HE)染色,觀察水凝膠與兔軟骨的生物相容性和炎癥反應(yīng)。2.將PNAGA水凝膠角膜基質(zhì)替代物移植到活體兔角膜上,選取右眼為手術(shù)眼,左眼作為正常對(duì)照。實(shí)驗(yàn)采用兩種手術(shù)方式將水凝膠角膜基質(zhì)替代物植入術(shù)眼,即板層移植和角膜層間移植。分別于術(shù)后1天、3天、7天、15天、1月、3月進(jìn)行肉眼和裂隙燈觀察兔眼角膜有無免疫排斥反應(yīng),記錄角膜透明度、角膜新生血管、角膜上皮化、植片水腫及結(jié)膜充血情況;于術(shù)后15天、3月行兔眼角膜共聚焦顯微鏡檢查,觀察角膜上皮生長(zhǎng)情況和角膜內(nèi)皮數(shù)量的變化,觀察是否有細(xì)胞長(zhǎng)入到水凝膠內(nèi);分別于術(shù)后1月、3月處死兔子,取兔子眼球行角膜蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin staining;HE)染色和角膜上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白CK3抗體AE5免疫組織化學(xué)檢測(cè)。結(jié)果1.成功分離培養(yǎng)兔角膜上皮細(xì)胞,細(xì)胞免疫熒光鑒定結(jié)果為陽(yáng)性,表明該細(xì)胞為角膜上皮細(xì)胞。角膜上皮細(xì)胞在PNAGA水凝膠上生長(zhǎng)狀態(tài)良好,細(xì)胞連接緊密。細(xì)胞活性毒性檢測(cè)結(jié)果顯示兔角膜上皮細(xì)胞在PNAGA水凝膠上存活率基本達(dá)100%,表明細(xì)胞具有良好的活性,PNAGA水凝膠無細(xì)胞毒性。2.12周后水凝膠在兔子軟骨內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定,沒有引起周圍組織的炎癥反應(yīng),也沒有與周圍軟骨組織融合在一起。未放入水凝膠的軟骨缺損組織已經(jīng)愈合。3.將PNAGA水凝膠移植到兔眼角膜,板層移植及角膜層間移植術(shù)后角膜及植片均保持透明,沒有出現(xiàn)角膜潰瘍和混濁,虹膜紋理及瞳孔清晰可見,無結(jié)膜充血情況,植片無水腫。角膜層間移植術(shù)后1月,可見有細(xì)小新生血管從植片上方爬到植片邊緣。術(shù)后3月,新生血管繼續(xù)生長(zhǎng),但僅為植片上方小部分。熒光素鈉染色角膜,板層移植角膜植片部位全部著染,術(shù)后一直無角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)到PNAGA水凝膠角膜基質(zhì)替代物表面。角膜層間移植僅切口部位輕微著染,無明顯角膜上皮缺損。4.共聚焦顯微鏡觀察板層移植術(shù)后,水凝膠表面沒有角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng),上皮細(xì)胞通過植片與角膜組織間的縫隙爬到植片下面,在手術(shù)形成的角膜基質(zhì)剖切面上重新角膜上皮化愈合,角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)良好,細(xì)胞間連接緊密。角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。角膜層間移植術(shù)后,角膜上皮細(xì)胞沒有出現(xiàn)明顯的上皮細(xì)胞死亡及上皮細(xì)胞大片缺損。角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。角膜基質(zhì)中,在水凝膠下面的角膜基質(zhì)上有角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,彼此間連接緊密。5.HE染色PNAGA水凝膠呈紫色均勻物質(zhì),表面和內(nèi)部無細(xì)胞生長(zhǎng),PNAGA水凝膠與周圍角膜組織處于彼此分離的狀態(tài),角膜組織無明顯水腫以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。植片下面角膜組織表面已經(jīng)上皮化修復(fù),細(xì)胞呈矮柱狀整齊排列,角膜層間移植術(shù)后,可見基質(zhì)內(nèi)水凝膠下面的角膜組織表面已經(jīng)上皮化修復(fù),細(xì)胞形態(tài)正常且整齊排列。6.角膜上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白CK3抗體AE5免疫組織化學(xué)檢測(cè),板層移植術(shù)后1月及3月,可見PNAGA水凝膠角膜基質(zhì)替代物下方的角膜組織上已經(jīng)上皮化修復(fù),細(xì)胞形態(tài)正常且整齊排列。角膜層間移植術(shù)后1月及3月,可見基質(zhì)內(nèi)水凝膠下面的角膜組織表面已經(jīng)上皮化修復(fù),細(xì)胞形態(tài)正常且整齊排列。結(jié)論1.實(shí)驗(yàn)所用超分子聚合物水凝膠的成分為多聚丙烯�；拾滨０�(Poly N-acryloyl glycinamide,PNAGA),是甘氨酸的衍生物,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單不含交聯(lián)劑。PNAGA水凝膠材料具有許多優(yōu)點(diǎn)。2.研究采用組織塊細(xì)胞培養(yǎng)法,可獲得形態(tài)及性狀穩(wěn)定的兔角膜上皮細(xì)胞。同時(shí)細(xì)胞活性毒性檢測(cè)顯示細(xì)胞在PNAGA水凝膠存活率基本達(dá)100%,說明PNAGA水凝膠不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性反應(yīng)。PNAGA水凝膠體外生物相容性良好,為其在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)體內(nèi)相容性的研究奠定了基礎(chǔ)。3.PNAGA水凝膠首次作為角膜基質(zhì)替代物材料應(yīng)用在角膜上,它的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)都非常穩(wěn)定,沒有發(fā)生降解也不引起周圍角膜組織的炎癥反應(yīng)和免疫排斥反應(yīng)。PNAGA水凝膠始終與角膜組織處于彼此獨(dú)立的狀態(tài),角膜上皮細(xì)胞不在水凝膠表面生長(zhǎng)。因此我們認(rèn)為PNAGA水凝膠為生物惰性材料。接下來將對(duì)材料進(jìn)行改進(jìn),使細(xì)胞便于粘附,并提高其體內(nèi)生物相容性。
【關(guān)鍵詞】：超分子聚合物水凝膠 生物相容性 角膜移植
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R318.08;R772.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說明11-12
• 前言12-17
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、超分子聚合物水凝膠體外生物相容性研究17-26
• 1.1 對(duì)象和方法17-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)所用的主要儀器和設(shè)備18
• 1.1.4 主要試劑及溶液配制18-20
• 1.1.5 兔角膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)20
• 1.1.6 角膜上皮細(xì)胞的鑒定20-21
• 1.1.7 將兔角膜上皮細(xì)胞接種到PNAGA水凝膠上21
• 1.1.8 細(xì)胞活性毒性檢測(cè)21-22
• 1.2 結(jié)果22-24
• 1.2.1 兔角膜上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定22-23
• 1.2.2 細(xì)胞在PNAGA水凝膠上的活性毒性檢測(cè)結(jié)果23-24
• 1.3 討論24-25
• 1.4 小結(jié)25-26
• 二、超分子聚合物水凝膠體內(nèi)生物相容性研究26-43
• 2.1 對(duì)象和方法26-29
• 2.1.1 將PNAGA水凝膠植入到活體兔后腿膝關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)26-27
• 2.1.2 將PNAGA水凝膠角膜基質(zhì)替代物植入到活體兔角膜上27-29
• 2.2 結(jié)果29-38
• 2.2.1 將PNAGA水凝膠移植到兔膝關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)HE染色結(jié)果29-30
• 2.2.2 將PNAGA水凝膠角膜基質(zhì)替代物移植到兔角膜上30-38
• 2.3 討論38-42
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇38
• 2.3.2 角膜基質(zhì)替代物材料的選擇38-42
• 2.4 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明48-49
• 綜述 羊膜移植在眼科的應(yīng)用49-58
• 綜述參考文獻(xiàn)54-58
• 致謝58-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59

  本文關(guān)鍵詞：超分子聚合物水凝膠角膜基質(zhì)替代物體內(nèi)體外生物相容性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：477198