本文關(guān)鍵詞：基于細胞膜片技術(shù)復合富血小板纖維蛋白（PRF）構(gòu)建可注射的組織工程骨的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】 骨不連和骨缺損的修復治療仍然是臨床上非常復雜的難題。幸運的是，近年來在再生醫(yī)學中取得的進展已能夠?qū)⒓毎委熡糜诠窃偕�。組織工程（tissueengineering）是指應(yīng)用工程學和生命科學的方法和技術(shù)來構(gòu)建生物替代物以恢復或改善組織功能的科學。然而，在移植組織工程化的骨或自體骨時往往需要開放的手術(shù)，與傳統(tǒng)的外科移植方式相比較，使用注射技術(shù)的骨修復方法有其明顯的優(yōu)勢，比如說易于操作，風險性低，幾乎沒有手術(shù)疤痕形成，微創(chuàng)和更好的可重復性等。 近年來，，細胞膜片已經(jīng)被證實為是在骨組織工程中非常有效的方法。通過成骨誘導形成的細胞膜片柔軟可皺縮，易于改變外形，并且厚度也可以控制。目前，已經(jīng)有將細胞膜片剪成大小合適的片段來構(gòu)建可注射的組織工程骨的實驗研究，但實驗中沒有加入生長因子，成骨能力有待提高。所以本實驗旨在通過加入能夠釋放自體生長因子的富血小板纖維蛋白，觀察其成骨能力有無提高。 【目的】 探討應(yīng)用富血小板纖維蛋白(PRF)膜片與骨髓基質(zhì)干細胞（BMSCs）成骨性膜片構(gòu)建可注射組織工程骨的可行性，并摸索PRF在體內(nèi)外對BMSC成骨膜片的影響。 【方法】 1．分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)細胞并構(gòu)建骨髓間充質(zhì)干細胞成骨性膜片。 2．然后抽取同一供體兔的動脈血制備PRF膜片，對制備的PRF膜片分別行HE染色，掃描電鏡和投射電鏡觀察；并制備不同梯度濃度的PRF培養(yǎng)基，探討其對細胞生長作用的濃度依賴關(guān)系；進一步制備最佳濃度的含PRF的成骨誘導培養(yǎng)基，體外觀察含有PRF的成骨誘導培養(yǎng)基對BMSC膜片的影響，RT-PCR檢測其成骨相關(guān)基因的表達變化情況。 3．體內(nèi)實驗：將制備好的PRF膜片剪碎，與前述制備的BMSC膜片片段混勻后，注射到裸鼠背部皮下。不混合PRF的單純BMSC膜片片段作為對照組。術(shù)后6周取材，進行大體觀察、體外X線掃描、Micro-CT、組織學等方法評價。 4．采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對實驗中相關(guān)數(shù)據(jù)進行方差分析或是隨機分組的兩組間均值的t檢驗。 【結(jié)果】 1．通過上述方法可以構(gòu)建出BMSC膜片且其具有成骨分化特征。 2．抽取動脈血制備的PRF對BMSC的生長刺激具有濃度依賴效應(yīng)。每一毫升動脈血制備的PRF置于兩毫升的培養(yǎng)基中為最佳的刺激濃度，細胞生長最好。 3．體外，PRF對MBSC膜片具有刺激作用：RT-PCR結(jié)果提示含最適宜濃度的PRF的成骨誘導液會促進BMSC膜片成骨基因的表達，結(jié)果有統(tǒng)計學差異。 4．BMSC膜片注射入裸鼠體內(nèi)后形成的硬組織，外形較好，Micro-CT和體外X線拍片顯示為異位礦化物，實驗組較對照組密度高，重量也較重，組織學切片證明有骨組織形成；且實驗組有更好的成骨特性。 【結(jié)論】 1．BMSC可以經(jīng)誘導形成膜片樣結(jié)構(gòu)，且具有成骨分化特征。 2．PRF可以促進BMSC的增殖生長。且體外可以增強BMSC成骨性膜片相關(guān)成骨基因的表達。 3．將BMSC成骨性膜片和PRF剪碎混勻后，注射到裸鼠皮下，有新生骨組織形成，且PRF可以增加BMSC成骨膜片的骨形成能力，結(jié)果有統(tǒng)計學意義。本研究為構(gòu)建組織工程骨提供了全新的方法和思路，應(yīng)用前景廣闊，為組織工程骨基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：細胞膜片 骨髓基質(zhì)干細胞 富血小板纖維蛋白 組織工程 骨 注射
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 文獻回顧13-23
• 實驗一 兔骨髓干細胞的分離培養(yǎng)和鑒定的實驗研究23-32
• 1 材料23-24
• 2 方法24-26
• 3 結(jié)果26-29
• 4 討論29-32
• 實驗二 BMSC 膜片的構(gòu)建及其成骨分化的實驗研究32-43
• 1 材料32-33
• 2 方法33-35
• 3 結(jié)果35-39
• 4 討論39-43
• 實驗三 PRF 的制備及其對 BMSC 和 BMSC 膜片的影響43-55
• 1 材料44-45
• 2 方法45-47
• 3 結(jié)果47-52
• 4 討論52-55
• 實驗四 BMSC 成骨性膜片復合 PRF 膜片注射入裸鼠體內(nèi)異位成骨的實驗研究55-66
• 1 材料56-57
• 2 方法57-58
• 3 結(jié)果58-63
• 4 討論63-66
• 小結(jié)66-67
• 參考文獻67-83
• 個人簡歷和研究成果83-84
• 致謝84-85

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐海燕;劉斌;安然;;富血小板纖維蛋白的研究進展[J];口腔醫(yī)學研究;2015年09期

  本文關(guān)鍵詞：基于細胞膜片技術(shù)復合富血小板纖維蛋白（PRF）構(gòu)建可注射的組織工程骨的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：434261