本文關鍵詞：不同代次角質(zhì)形成細胞構建組織工程皮膚的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：皮膚是人體的第一道防御屏障，最易受到各種損傷和疾病的傷害而導致皮膚缺損，組織工程皮膚產(chǎn)品的研發(fā)為皮膚缺損的治療提供了新的手段。角質(zhì)形成細胞構建表皮結構為外層皮膚提供有利的物理屏障。但是體外角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)易出現(xiàn)分化、增殖能力有限、培養(yǎng)周期長等缺點，因此通過研究角質(zhì)形成細胞及其傳代后細胞在組織工程皮膚的增殖分化情況，可以為我們篩選更優(yōu)代次的種子細胞提供依據(jù)。 目的： 1、比較三維培養(yǎng)條件下，不同代次角質(zhì)形成細胞在真皮層上的分化增殖能力。 2、初步觀察外源性Ⅳ型膠原對基底膜及表皮形態(tài)的變化情況影響。 3、了解角蛋白、絲聚合蛋白在不同代次角質(zhì)形成細胞構建人工皮膚中的變化情況。 方法： 1、酶消化分離青年男性包皮標本獲得角質(zhì)形成細胞，用Ⅳ型膠原粘附法進行分選，并用角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)、傳代，觀察1～5代次角質(zhì)形成細胞在二維條件下的生長狀況；用1～5代次角質(zhì)形成細胞構建復方殼多糖組織工程皮膚，分為在表真皮之間加入外源性Ⅳ型膠原組及不加Ⅳ型膠原組，通過HE、PAS染色及電鏡，觀察各組組織工程皮膚的結構形態(tài)及基底膜形成狀況。 2、取2代角質(zhì)形成細胞構建組織工程皮膚，通過MTT法比較不同密度表皮內(nèi)角質(zhì)形成細胞的增殖情況;同時在密度一定條件下，構建1、3、5代次角質(zhì)形成細胞的組織工程皮膚，用MTT法檢測各代次表皮細胞的生長情況；并利用CK1/CK10、CK5/CK14、Ki67免疫組化染色比較各組組織工程皮膚表皮的增殖分化能力。 3、用Western blot檢測絲聚合蛋白在各代次表皮的表達情況。 結果： 1、1～5代次角質(zhì)形成細胞構建的組織工程皮膚都有明顯的表真皮結構。1代、2代較其他代次的分層情況好，且含有黑色素細胞；2代表皮層厚度明顯高于其他代次（P0.05）。 2、加Ⅳ型膠原組的表真皮間粘附的緊密程度高于未加Ⅳ型膠原組，Ⅳ型膠原對表皮層的厚度影響不大(P0.05)。Ⅳ型膠原組PAS染色陰性，說明單獨加Ⅳ型膠原在培養(yǎng)時間非常有限的情況下難以形成基底膜結構。 3、在5×10~4/ml～2×10~5/ml細胞范圍內(nèi)，組織工程皮膚的表皮中接種的角質(zhì)形成細胞量越大，越有利于加快細胞增殖速度，并且前2代角質(zhì)形成細胞增殖活力較好。 4、2代角質(zhì)形成細胞ki67增殖系數(shù)接近正常皮膚，，其余各代次角質(zhì)形成細胞的增殖系數(shù)逐漸減少（P0.05）。 5、CK1/CK10、CK5/CK14在1、2代皮膚中陽性表達明顯，其余代次對于兩種角蛋白的表達并不明顯。 5、絲聚合蛋白在各代次角質(zhì)形成細胞構建的表皮中都能表達，以1、2代角質(zhì)形成細胞中表達居多。 結論： 本研究在三維培養(yǎng)條件下，對組織工程皮膚的種子細胞即角質(zhì)形成細胞及傳代細胞進行比較研究，合適用作種子細胞的代次是1、2代；Ⅳ型膠原是基底膜重要的組成成分，外源性Ⅳ型膠原能加強表真皮的粘附，但如要形成結構完整的基底膜，需要延長培養(yǎng)時間，增加外源性Ⅳ型膠原的接種量等；各代次角質(zhì)形成細胞均有絲聚合蛋白，說明復方殼多糖組織工程皮膚具有較好保濕、抗菌作用。
【關鍵詞】：組織工程 角質(zhì)形成細胞 增殖 分化 Ⅳ型膠原 三維
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• Abstract5-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 不同代次角質(zhì)形成細胞構建組織工程皮膚及組織形態(tài)學比較12-26
• 2.1 材料與方法12-17
• 2.2 結果17-24
• 2.3 討論24-26
• 第三章 不同代次角質(zhì)形成細胞構建的組織工程皮膚增殖分化的比較26-36
• 3.1 材料與方法26-28
• 3.2 結果28-33
• 3.3 討論33-36
• 第四章 絲聚合蛋白在組織工程皮膚中的表達情況36-43
• 4.1 材料與方法36-40
• 4.2 結果40-41
• 4.3 討論41-43
• 全文總結43-44
• 參考文獻44-48
• 文獻綜述一48-55
• 參考文獻52-55
• 文獻綜述二55-63
• 參考文獻59-63
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章63-64
• 致謝64

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：不同代次角質(zhì)形成細胞構建組織工程皮膚的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：426603