發(fā)布時間：2017-06-01 15:17

  本文關(guān)鍵詞：單分子力測定技術(shù)研究A549細(xì)胞與核酸適配體相互作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：以細(xì)胞為識別目標(biāo)的核酸適配體是指通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化（cell-SELEX）技術(shù)篩選所獲得的短片段單鏈核苷酸序列，因其具有高特異性，高親和性，易于合成和修飾等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域引起廣泛關(guān)注。雖然已經(jīng)知道核酸適配體是通過形成特殊的構(gòu)型以氫鍵、疏水作用和范德華力等方式與靶目標(biāo)相互結(jié)合，但是目前關(guān)于核酸適配體與靶目標(biāo)結(jié)合機(jī)制和性能方面的研究相對較少，特別是對于核酸適配體與細(xì)胞相互作用的研究鮮有報道。在單分子水平上研究細(xì)胞與核酸適配體的相互作用，有利于闡明細(xì)胞與核酸適配體的結(jié)合機(jī)理、解離過程和結(jié)合位點(diǎn)等信息，同時也為核酸適配體分子探針的設(shè)計、親和力和穩(wěn)定性的改善、核酸適配體生物傳感器的設(shè)計等提供理論基礎(chǔ)，因此已成為生物化學(xué)和分子醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)與難點(diǎn)之一。 本論文利用單分子力測定技術(shù)在活細(xì)胞水平上研究非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞與其四條核酸適配體S1、S11e、S15和S6的相互作用。主要內(nèi)容如下： 1.單分子力測定技術(shù)研究核酸適配體與A549細(xì)胞結(jié)合的動力學(xué)力譜。在近生理條件下考察了四條核酸適配體分別與A549細(xì)胞結(jié)合的特異性作用力大小，并用動力學(xué)力譜研究了不同加載速率下四條核酸適配體分別與細(xì)胞的相互作用，，得到了四條核酸適配體-細(xì)胞解離過程的動力學(xué)參數(shù)和能壘。比較在同樣加載速率范圍內(nèi)四條核酸適配體的能壘，發(fā)現(xiàn)它們從結(jié)合態(tài)到解離態(tài)經(jīng)過的途徑相近，解離過程均需要跨越兩個能壘，經(jīng)過一個中間態(tài)達(dá)到解離終態(tài)，并且A549細(xì)胞與其四條核酸適配體相互作用結(jié)合能力的強(qiáng)弱與內(nèi)外能壘的大小有關(guān)。 2.單分子力測定技術(shù)用于核酸適配體與A549細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的研究。采用四條核酸適配體S1、S11e、S15和S6，以其中一條封閉細(xì)胞表面相應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)，然后用單分子力測定技術(shù)考察另外三條與封閉后細(xì)胞的相互結(jié)合情況。結(jié)果表明四條核酸適配體與細(xì)胞結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)均不相同。還利用流式細(xì)胞術(shù)對此結(jié)果進(jìn)行驗證，其結(jié)果與單分子力測定技術(shù)的實(shí)驗結(jié)果一致。 以上研究為從單分子水平上闡明細(xì)胞與核酸適配體的相互作用機(jī)理提供了有價值的參考信息。
【關(guān)鍵詞】：原子力顯微鏡 單分子力測定 動力學(xué)力譜 核酸適配體 A549細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411;R318
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 本文所用英文縮略詞表8-11
• 第1章 緒論11-25
• 1.1 檢測核酸適配體與其靶目標(biāo)單分子相互作用的常見方法11-16
• 1.1.1 單分子熒光技術(shù)11-12
• 1.1.2 光鑷12-13
• 1.1.3 原子力顯微鏡13-16
• 1.2 核酸適配體結(jié)合位點(diǎn)的研究方法16-23
• 1.2.1 核酸適配體與純化蛋白結(jié)合位點(diǎn)的研究方法17-19
• 1.2.2 核酸適配體與細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的研究方法19-23
• 1.3 本文擬開展的研究工作23-25
• 第2章 單分子力測定技術(shù)研究核酸適配體與 A549 細(xì)胞結(jié)合的動力學(xué)力譜25-43
• 2.1 前言25
• 2.2 實(shí)驗部分25-30
• 2.2.1 主要試劑和儀器25-27
• 2.2.2 實(shí)驗方法27-30
• 2.3 結(jié)果與討論30-41
• 2.3.1 原子力顯微鏡成像30-31
• 2.3.2 激光共聚焦成像31-32
• 2.3.3 接觸時間對成鍵幾率的影響32
• 2.3.4 單分子力測定核酸適配體與 A549 細(xì)胞相互作用32-34
• 2.3.5 S1、S11e、S15 和 S6 與 A549 細(xì)胞特異性相互作用力的證明34-37
• 2.3.6 不同加載速率下核酸適配體與 A549 細(xì)胞之間的單分子作用力37-41
• 2.4 小結(jié)41-43
• 第3章 單分子力測定技術(shù)用于核酸適配體與 A549 細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)的研究43-57
• 3.1 前言43
• 3.2 實(shí)驗方法43-46
• 3.2.1 主要儀器和試劑43-44
• 3.2.2 實(shí)驗方法44-46
• 3.3 結(jié)果與討論46-56
• 3.3.1 單分子力測定對于細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)封閉濃度的考察46-47
• 3.3.2 單分子力測定考察 S1、S11e、S15 和 S6 與 A549 細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)47-55
• 3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)分析55-56
• 3.4 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 附錄 A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄66-67
• 附錄 B 第二章中所涉及到的公式計算67-68
• 致謝68

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：412876