本文關(guān)鍵詞：單分子力測定技術(shù)研究A549細胞與核酸適配體相互作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：以細胞為識別目標的核酸適配體是指通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化（cell-SELEX）技術(shù)篩選所獲得的短片段單鏈核苷酸序列，因其具有高特異性，高親和性，易于合成和修飾等優(yōu)點，已經(jīng)在生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域引起廣泛關(guān)注。雖然已經(jīng)知道核酸適配體是通過形成特殊的構(gòu)型以氫鍵、疏水作用和范德華力等方式與靶目標相互結(jié)合，但是目前關(guān)于核酸適配體與靶目標結(jié)合機制和性能方面的研究相對較少，特別是對于核酸適配體與細胞相互作用的研究鮮有報道。在單分子水平上研究細胞與核酸適配體的相互作用，有利于闡明細胞與核酸適配體的結(jié)合機理、解離過程和結(jié)合位點等信息，同時也為核酸適配體分子探針的設(shè)計、親和力和穩(wěn)定性的改善、核酸適配體生物傳感器的設(shè)計等提供理論基礎(chǔ)，因此已成為生物化學(xué)和分子醫(yī)學(xué)的研究熱點與難點之一。 本論文利用單分子力測定技術(shù)在活細胞水平上研究非小細胞肺癌A549細胞與其四條核酸適配體S1、S11e、S15和S6的相互作用。主要內(nèi)容如下： 1.單分子力測定技術(shù)研究核酸適配體與A549細胞結(jié)合的動力學(xué)力譜。在近生理條件下考察了四條核酸適配體分別與A549細胞結(jié)合的特異性作用力大小，并用動力學(xué)力譜研究了不同加載速率下四條核酸適配體分別與細胞的相互作用，，得到了四條核酸適配體-細胞解離過程的動力學(xué)參數(shù)和能壘。比較在同樣加載速率范圍內(nèi)四條核酸適配體的能壘，發(fā)現(xiàn)它們從結(jié)合態(tài)到解離態(tài)經(jīng)過的途徑相近，解離過程均需要跨越兩個能壘，經(jīng)過一個中間態(tài)達到解離終態(tài)，并且A549細胞與其四條核酸適配體相互作用結(jié)合能力的強弱與內(nèi)外能壘的大小有關(guān)。 2.單分子力測定技術(shù)用于核酸適配體與A549細胞結(jié)合位點的研究。采用四條核酸適配體S1、S11e、S15和S6，以其中一條封閉細胞表面相應(yīng)的結(jié)合位點，然后用單分子力測定技術(shù)考察另外三條與封閉后細胞的相互結(jié)合情況。結(jié)果表明四條核酸適配體與細胞結(jié)合的結(jié)合位點均不相同。還利用流式細胞術(shù)對此結(jié)果進行驗證，其結(jié)果與單分子力測定技術(shù)的實驗結(jié)果一致。 以上研究為從單分子水平上闡明細胞與核酸適配體的相互作用機理提供了有價值的參考信息。
【關(guān)鍵詞】：原子力顯微鏡 單分子力測定 動力學(xué)力譜 核酸適配體 A549細胞
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411;R318
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 本文所用英文縮略詞表8-11
• 第1章 緒論11-25
• 1.1 檢測核酸適配體與其靶目標單分子相互作用的常見方法11-16
• 1.1.1 單分子熒光技術(shù)11-12
• 1.1.2 光鑷12-13
• 1.1.3 原子力顯微鏡13-16
• 1.2 核酸適配體結(jié)合位點的研究方法16-23
• 1.2.1 核酸適配體與純化蛋白結(jié)合位點的研究方法17-19
• 1.2.2 核酸適配體與細胞結(jié)合位點的研究方法19-23
• 1.3 本文擬開展的研究工作23-25
• 第2章 單分子力測定技術(shù)研究核酸適配體與 A549 細胞結(jié)合的動力學(xué)力譜25-43
• 2.1 前言25
• 2.2 實驗部分25-30
• 2.2.1 主要試劑和儀器25-27
• 2.2.2 實驗方法27-30
• 2.3 結(jié)果與討論30-41
• 2.3.1 原子力顯微鏡成像30-31
• 2.3.2 激光共聚焦成像31-32
• 2.3.3 接觸時間對成鍵幾率的影響32
• 2.3.4 單分子力測定核酸適配體與 A549 細胞相互作用32-34
• 2.3.5 S1、S11e、S15 和 S6 與 A549 細胞特異性相互作用力的證明34-37
• 2.3.6 不同加載速率下核酸適配體與 A549 細胞之間的單分子作用力37-41
• 2.4 小結(jié)41-43
• 第3章 單分子力測定技術(shù)用于核酸適配體與 A549 細胞結(jié)合位點的研究43-57
• 3.1 前言43
• 3.2 實驗方法43-46
• 3.2.1 主要儀器和試劑43-44
• 3.2.2 實驗方法44-46
• 3.3 結(jié)果與討論46-56
• 3.3.1 單分子力測定對于細胞結(jié)合位點封閉濃度的考察46-47
• 3.3.2 單分子力測定考察 S1、S11e、S15 和 S6 與 A549 細胞結(jié)合位點47-55
• 3.3.3 流式細胞術(shù)分析55-56
• 3.4 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻58-66
• 附錄 A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄66-67
• 附錄 B 第二章中所涉及到的公式計算67-68
• 致謝68

【共引文獻】

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本文編號：412876