與“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”的一次邂逅——從利用雜交瘤技術(shù)制備單抗說起
【文章頁數(shù)】:3 頁
【部分圖文】:
圖1誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合
無論通過什么手段誘導(dǎo)細(xì)胞融合,融合產(chǎn)物都非常復(fù)雜。有未融合的細(xì)胞、相同類型融合的細(xì)胞,以及不同類型融合的細(xì)胞(圖1)。所以必須經(jīng)過篩選才能獲得由不同類型融合的雜交瘤細(xì)胞。細(xì)胞合成DNA通常有2條途徑:1)主要途徑,利用糖和氨基酸合成核苷酸,進(jìn)而合成DNA。2)替代途徑,通過HGP....
圖2HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)中的小鼠骨髓瘤細(xì)胞是一類HGPRT代謝缺陷型細(xì)胞。因此在HAT培養(yǎng)基中,未融合與融合的骨髓瘤細(xì)胞在甲氨蝶呤A的阻遏下不能合成DNA,細(xì)胞因無法增殖而死亡(圖2)。未融合與融合的免疫B細(xì)胞,因本身不具備增殖能力,5~7d也凋亡了。最終在HAT培養(yǎng)基中,只有雜交瘤細(xì)胞可通過替代....
圖3篩選產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞
第2次篩選是為了獲得能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞。將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)液通過有限稀釋的方法將細(xì)胞分開,再進(jìn)行細(xì)胞的克隆化培養(yǎng),獲得單克隆細(xì)胞群。最后利用抗體篩選技術(shù),例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、免疫熒光標(biāo)記法(IFA)等,對(duì)單克隆細(xì)胞產(chǎn)生的抗體進(jìn)行陽性檢測(cè),即可篩選出能產(chǎn)生專一....
本文編號(hào):3960990
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