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脫細(xì)胞羊膜支架復(fù)合Scleraxis慢病毒轉(zhuǎn)染的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)兔腱-骨愈合

發(fā)布時(shí)間:2024-03-10 18:33
  背景:脫細(xì)胞羊膜支架是一種天然支架,具有良好的生物相容性,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于組織工程的相關(guān)領(lǐng)域。Scleraxis能夠促進(jìn)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向人韌帶細(xì)胞分化,進(jìn)而促進(jìn)腱-骨愈合。目的:探討脫細(xì)胞羊膜支架復(fù)合Scleraxis慢病毒轉(zhuǎn)染的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞能否促進(jìn)兔腱-骨愈合。方法:①體外分離培養(yǎng)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)過(guò)傳代培養(yǎng)后觀察細(xì)胞的形態(tài);②體外構(gòu)建Scleraxis慢病毒然后以最適感染復(fù)數(shù)轉(zhuǎn)染第3代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,q-PCR檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效率;③用酶消化法制備脫細(xì)胞羊膜支架,然后體外將轉(zhuǎn)染Scleraxis慢病毒的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞接種到脫細(xì)胞羊膜支架上面,鬼筆環(huán)肽染色觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況;④將脫細(xì)胞羊膜支架復(fù)合轉(zhuǎn)染Scleraxis慢病毒的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞包裹新西蘭大白兔跟腱,然后移植到骨隧道內(nèi),觀察其對(duì)腱-骨愈合的影響。結(jié)果與結(jié)論:①第3代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好;②Scleraxis慢病毒轉(zhuǎn)染后96 h表達(dá)穩(wěn)定的綠色熒光,Slclerxis的m RNA表達(dá)水平明顯提高,說(shuō)明轉(zhuǎn)染成功;③脫細(xì)胞羊膜支架的上皮細(xì)胞基本消失,證明脫細(xì)胞比較徹底,同時(shí)其基底...

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圖1脫細(xì)胞羊膜支架的制備過(guò)程

圖1脫細(xì)胞羊膜支架的制備過(guò)程

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圖2倒置相差顯微鏡下觀察人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)(×40)

圖2倒置相差顯微鏡下觀察人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)(×40)

圖1脫細(xì)胞羊膜支架的制備過(guò)程圖4實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Scleraxis的mRNA表達(dá)水平


圖4實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Scleraxis的mRNA表達(dá)水平

圖4實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Scleraxis的mRNA表達(dá)水平

圖2倒置相差顯微鏡下觀察人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)(×40)圖3Scleraxis慢病毒感染人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞


圖3Scleraxis慢病毒感染人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞

圖3Scleraxis慢病毒感染人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞

圖4實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Scleraxis的mRNA表達(dá)水平圖5脫細(xì)胞羊膜支架的性能



本文編號(hào):3925193

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