本文關(guān)鍵詞：導電纖維支架調(diào)控心肌細胞和肝細胞的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：電紡纖維支架能夠很好地模擬細胞胞外基質(zhì)(ECM)的天然空間結(jié)構(gòu),非常適合細胞的支撐生長,利于形成類組織體,但常規(guī)聚合物纖維支架缺乏導電性,難于滿足培養(yǎng)神經(jīng)細胞和心肌細胞等的要求。因此,本論文將多壁碳納米管(CNT)摻雜到高分子聚合物中,并使用高速轉(zhuǎn)動接收器制備了不同形貌和電導率的定向纖維支架。聚乙二醇-聚乳酸(PELA)和CNT以不同比例混合,制備了不同電導率的混紡和同軸紡纖維支架,并用于心肌細胞的研究；聚苯乙烯馬來酸酐(PMSA)和CNT以不同比例混紡得到導電纖維支架,經(jīng)半乳糖修飾后,用于肝細胞的研究。心肌細胞在混紡和同軸紡PELA/CNT導電纖維支架上生長良好,細胞狹長鋪張,與纖維支架取向一致,形成定向的心肌膜片。結(jié)果表明,從心肌細胞的活力、遷移和蛋白表達等方面比較,同軸紡纖維支架的綜合性能優(yōu)于混紡導電支架。培養(yǎng)5天后心肌細胞鋪展生長,但沒有形成大片區(qū),且跳動頻率不同步,其中CNT含量為4-5%纖維支架上的心肌細胞優(yōu)于其他組,細胞鋪展、蛋白表達較為突出。培養(yǎng)10天后心肌細胞鋪展成片,細胞更為狹長,跳動頻率一致,尤其是在CNT含量為4%的同軸紡支架上,心肌細胞鋪滿整個支架,且長寬比值達到為6.5,同步跳動頻率達到80次/min,體現(xiàn)出心肌細胞和導電纖維支架的電機械耦合良好,適于心肌膜片的研究。肝細胞在PSMA/CNT導電纖維支架上粘附聚集成球,3天后在支架上恢復細胞極性,開始部分肝細胞功能,如白蛋白分泌和尿素合成；培養(yǎng)7天和15天后,與其他支架相比,在CNT含量為3%的支架上肝細胞成球良好,約為100 μm,保持肝功能良好且持續(xù)時間長。進一步研究了對甲苯磺丁脲、S-華法林、咪達唑侖、睪酮、對乙酰氨基酚等藥物在此肝細胞培養(yǎng)體系上的代謝清除率,結(jié)果表明與體內(nèi)代謝具有一定的相關(guān)性,尤其CNT含量為3%的支架上培養(yǎng)的肝細胞,其體內(nèi)-體外相關(guān)系數(shù)為0.663；同時在利福平、谷胱甘肽、酮康唑、丙磺舒等酶誘導劑或抑制劑作用下,研究CYP 3A4和1I相酶的酶活性、睪酮和對乙酰氨基酚的代謝清除率,結(jié)果表明該肝細胞模型能夠較好地酶活力和藥物代謝清除率的誘導／抑制響應性,體現(xiàn)出該肝細胞培養(yǎng)模型有望用于體外藥物篩選模型的研究。
【關(guān)鍵詞】：心肌細胞 肝細胞 組織工程 導電纖維支架 電導率 肝細胞功能 藥物代謝 代謝清除率 藥物相互作用
【學位授予單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-13
• 第一章 緒論13-25
• 1.1 組織工程支架13-16
• 1.1.1 組織工程概況13-14
• 1.1.2 組織工程支架的研究現(xiàn)狀14
• 1.1.3 導電組織工程支架的研究現(xiàn)狀14
• 1.1.4 電紡纖維作為組織工程支架的研究現(xiàn)狀14-15
• 1.1.5 導電纖維支架的研究現(xiàn)狀15-16
• 1.2 心肌組織的體外構(gòu)建16-18
• 1.2.1 心肌組織、細胞的特點、功能17-18
• 1.2.2 心肌組織體外構(gòu)建的研究現(xiàn)狀18
• 1.3 肝組織的體外構(gòu)建18-23
• 1.3.1 肝組織、細胞的特點、功能18-19
• 1.3.2 肝組織體外構(gòu)建的研究現(xiàn)狀19-21
• 1.3.3 藥物篩選模型的研究現(xiàn)狀21-22
• 1.3.4 體外構(gòu)建組織用于藥物篩選的研究現(xiàn)狀22-23
• 1.4 本課題的研究意義與內(nèi)容23-25
• 1.4.1 研究意義和內(nèi)容23-24
• 1.4.2 創(chuàng)新點24-25
• 第二章 聚合物導電纖維調(diào)控心肌細胞行為的研究25-43
• 2.1 試驗部分25-29
• 2.1.1 試驗材料25-26
• 2.1.2 導電定向纖維的制備26
• 2.1.3 纖維的形貌和結(jié)構(gòu)26
• 2.1.4 纖維的力學和導電性能26-27
• 2.1.5 細胞的提取及纖維上的培養(yǎng)27
• 2.1.6 纖維上心肌細胞的形貌27
• 2.1.7 纖維上心肌細胞的活性27-28
• 2.1.8 纖維上心肌細胞的蛋白分泌28-29
• 2.1.9 纖維上心肌細胞的波動29
• 2.1.10 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理29
• 2.2 實驗結(jié)果及討論29-40
• 2.2.1 電紡纖維支架的形貌表征29-31
• 2.2.2 電紡纖維支架的力學性能31-32
• 2.2.3 電紡纖維支架的導電性能32-33
• 2.2.4 電紡纖維支架的細胞活力33
• 2.2.5 電紡纖維支架上心肌細胞的形貌33-35
• 2.2.6 各種纖維膜上的細胞的蛋白分泌35-39
• 2.2.7 電紡纖維支架的細胞的跳動頻率39-40
• 2.3 討論40-42
• 2.4 本章小結(jié)42-43
• 第三章 導電纖維支架對肝細胞的研究43-55
• 3.1 試驗部分43-47
• 3.1.1 實驗材料43
• 3.1.2 導電電紡纖維支架的制備43-44
• 3.1.3 導電電紡纖維支架的改性44
• 3.1.4 纖維的形貌和結(jié)構(gòu)44
• 3.1.5 纖維的力學和導電性能44
• 3.1.6 肝細胞的提取及纖維上的培養(yǎng)44-45
• 3.1.7 導電纖維支架上肝細胞的形貌45
• 3.1.8 纖維上肝細胞的活性45
• 3.1.9 導電纖維支架上肝細胞的熒光染色和膽管形態(tài)45-46
• 3.1.10 導電纖維支架上肝細胞的功能46-47
• 3.1.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理47
• 3.2 實驗結(jié)果47-52
• 3.2.1 導電電紡纖維支架的形貌47-48
• 3.2.2 導電纖維支架的力學性能和導電性能48-49
• 3.2.3 導電纖維支架上肝細胞的活力49-50
• 3.2.4 導電纖維支架上肝細胞的形貌50-51
• 3.2.5 導電纖維支架上肝細胞的功能51-52
• 3.3 結(jié)果討論52-53
• 3.4 本章小結(jié)53-55
• 第四章 體外培養(yǎng)肝細胞用于藥物代謝的研究55-63
• 4.1 實驗部分55-57
• 4.1.1 實驗材料55
• 4.1.2 肝細胞代謝實驗55-56
• 4.1.3 藥物代謝的誘導和抑制實驗56-57
• 4.1.4 統(tǒng)計學方法57
• 4.2 結(jié)果分析57-60
• 4.2.1 藥物代謝清除率57-58
• 4.2.2 與體內(nèi)相關(guān)性評價分析58
• 4.2.3 肝細胞代謝酶的誘導和抑制效果58-59
• 4.2.4 肝細胞藥物代謝的誘導和抑制效果59-60
• 4.3 結(jié)果討論60-62
• 4.4 本章小結(jié)62-63
• 全文結(jié)論63-65
• 致謝65-66
• 參考文獻66-73
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文73-74
• 論文成果申明74

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1 丁義濤,陳鐘,張鶴云;肝細胞大規(guī)模培養(yǎng)的一種簡便方法[J];江蘇醫(yī)藥;2001年07期

2 閔峰;郝飛;劉冰;劉國棟;黃紀明;蔣天倫;;樹，

本文編號：390639