目的探索沉默P75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白受體(p75 neurotrophin receptor,P75NTR)聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)對(duì)大鼠BMSCs增殖活性和復(fù)合脫鈣骨基質(zhì)(demineralized bone matrix,DBM)構(gòu)建組織工程骨異位成骨能力的影響。方法通過(guò)貼壁分離法培養(yǎng)SD大鼠BMSCs并傳代。取第3代BMSCs,分別用慢病毒介導(dǎo)沉默P75NTR基因(B組)、NGF過(guò)表達(dá)基因(C組)、沉默P75NTR和NGF過(guò)表達(dá)雙基因(D組)轉(zhuǎn)染,以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對(duì)照(A組)。轉(zhuǎn)染7 d后熒光顯微鏡觀察目的基因熒光蛋白表達(dá);細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后連續(xù)8 d細(xì)胞的活性;Western blot檢測(cè)各組P75NTR和NGF蛋白表達(dá)。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡分別觀察沉默P75NTR和NGF過(guò)表達(dá)雙基因轉(zhuǎn)染后BMSCs與DBM的黏附情況。將上述4組轉(zhuǎn)染后BMSCs分別與DBM共培養(yǎng)制備組織工程骨后,埋植于8周齡SD大鼠背側(cè)皮下構(gòu)建皮下異位成骨模型(n=6),術(shù)后4、8周行HE染色,術(shù)后8周ALP染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runt-related...

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