本文關(guān)鍵詞：精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（RGD）多肽修飾多孔鉭材料對軟骨細胞粘附性影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究RGD、ColⅡ和RGD/ColⅡ混合修飾多孔鉭支架對其形貌及軟骨細胞早期黏附、增殖、基質(zhì)分泌等生物學行為的影響。探討骨細胞外基質(zhì)成分修飾多孔鉭做為軟骨組織工程支架材料修復軟骨缺損、促進軟骨再生，恢復軟骨生理結(jié)構(gòu)與功能的可行性，為進一步體內(nèi)實驗及臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法1掃描電鏡觀察多孔鉭材料及RGD、ColⅡ和含1mg/mlRGD和1mg/mlⅡ型膠原混合液修飾多孔鉭支架后的形貌特征；檢測并觀察各組多孔鉭親水性。2以含0.2mg/mlRGD和1mg/mlⅡ型膠原混合液、含1mg/mlRGD和1mg/mlⅡ型膠原混合液、含5mg/mlRGD和1mg/mlⅡ型膠原混合液、含10mg/mlRGD和1mg/mlⅡ型膠原混合液、單純1mg/ml RGD(Ta-RGD組)及單純1mg/mlⅡ型膠原(Ta-ColⅡ組)分別對多孔鉭支架進行修飾，以未修飾純鉭支架作為陰性對照組，空白24孔板作為空白對照組，將第2代軟骨細胞接種到上述支架上，體外培養(yǎng)2h、4h，沉淀法檢測各組支架軟骨細胞粘附率，對所得數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，并掃描電鏡觀察比較4h時細胞在各組鉭材料上的黏附情況。3兔軟骨細胞與各組多孔鉭支架體外復合培養(yǎng)，經(jīng)掃描電鏡觀察比較細胞在材料上的黏附、形態(tài)、生長及增殖情況；MTT法檢測比較各組多孔鉭支架對軟骨細胞增殖的影響；羥脯氨酸法測定各組多孔鉭上軟骨細胞分泌II型膠原量。 結(jié)果1多孔鉭支架表面成蜂窩狀，空隙分布均勻。掃描電鏡觀察，材料表面為直徑約400~600μm微孔結(jié)構(gòu)，孔隙為三維立體的連通結(jié)構(gòu)，類似于松質(zhì)骨。多孔鉭經(jīng)RGD修飾后，，其三維立體多孔結(jié)構(gòu)無明顯變化，表面有斑點樣涂層。多孔鉭經(jīng)ColⅡ及RGD/ColⅡ混合物修飾后，其三維立體多孔結(jié)構(gòu)亦無改變，其表面可見一薄膜涂層，分布廣泛，薄厚較均勻。2親水性測定：測得純Ta組、Ta-RGD組、Ta-ColⅡ組及Ta-RGD/ColⅡ1.0mg/ml組支架親水率分別為1.3%±0.1%、1.5%±0.3%、4.1%±0.6%、4.3%±0.5%，修飾后多孔鉭親水率較純鉭顯著提高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。3粘附率的檢測：改性后材料細胞黏附率較改性前支架均有明顯提高，各Ta-RGD/ColⅡ組＞Ta-ColⅡ組＞Ta-RGD組＞純Ta組，組間比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。另外不同濃度RGD與ColⅡ混合修飾多孔鉭，其粘附率隨RGD濃度的增加而增加， RGD濃度提高到一定程度后，其促黏附能力存在飽和現(xiàn)象。掃面電鏡觀察結(jié)果印證了上述結(jié)論。4細胞增殖檢測：MTT法進行細胞增殖檢測結(jié)果顯示，第1天各組間比較，Ta-RGD組＞純Ta組、Ta-ColⅡ組＞純Ta組、Ta-RGD/ColⅡ1.0mg/ml組＞RGD組、Ta-RGD/ColⅡ1.0mg/ml組＞ColⅡ組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Ta-ColⅡ組雖高于Ta-RGD組，但無統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；第3天、5天、7天、10天和13天，Ta-RGD/ColⅡ1.0mg/ml組＞Ta-ColⅡ組＞Ta-RGD組＞純Ta組，各組間比較均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。掃描電鏡觀察直觀的印證了上述結(jié)論。5羥脯氨酸法測定各組多孔鉭上軟骨細胞分泌II型膠原量，Ta-RGD/ColⅡ1.0mg/ml組＞Ta-ColⅡ組＞Ta-RGD組＞純Ta組，組間比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論1多孔鉭經(jīng)RGD、ColⅡ修飾后其多孔結(jié)構(gòu)無改變，但親水性提高。2經(jīng)RGD肽修飾的多孔鉭表面與軟骨細胞具有較高的黏附率及活性，故可作為黏附識別序列促進軟骨細胞在鉭表面粘附和增殖；Ⅱ型膠原修飾多孔鉭后同樣與軟骨細胞具有較好的粘附性和生物相容性。3RGD-ColⅡ混合修飾多孔鉭后，可在其表面模擬軟骨細胞外基質(zhì)，促進鉭與軟骨細胞的粘附及增殖，其中最優(yōu)組為Ta-RGD/ColⅡ1mg/ml組，有望成為軟骨組織工程的理想支架。
【關(guān)鍵詞】：多孔鉭 RGD ColⅡ 表面修飾 軟骨組織工程
【學位授予單位】：河北聯(lián)合大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08;R687.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實驗研究13-44
• 1.1 材料與方法13-19
• 1.1.1 實驗動物及材料13-15
• 1.1.2 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭材料的形貌特征及親水性15
• 1.1.3 軟骨細胞的分離培養(yǎng)及鑒定15-16
• 1.1.4 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭對軟骨細胞黏附的影響16-17
• 1.1.5 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭對軟骨細胞增殖的影響17-18
• 1.1.6 羥脯氨酸法測定 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭上軟骨細胞分泌 II 型膠原量18-19
• 1.2 結(jié)果19-31
• 1.2.1 多孔鉭支架修飾前后的形貌特征及親水性19-23
• 1.2.2 兔軟骨細胞的形態(tài)學觀察及鑒定23-24
• 1.2.3 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭對軟骨細胞粘附性的影響24-26
• 1.2.4 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭對軟骨細胞增殖的影響26-27
• 1.2.5 掃描電鏡觀察 Ta-RGD/ColⅡ-軟骨細胞復合物的細胞形態(tài)27-30
• 1.2.6 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭上軟骨細胞分泌 II 型膠原量30-31
• 1.3 討論31-40
• 1.3.1 多孔鉭支架修飾前后的物理特性31-34
• 1.3.2 種子細胞的選擇及鑒定34-35
• 1.3.3 RGD、ColⅡ修飾多孔鉭支架對軟骨細胞粘附、增殖及基質(zhì)分泌的影響35-40
• 1.4 結(jié)論40
• 參考文獻40-44
• 第2章 綜述細胞外基質(zhì)成分修飾骨科植入物的研究進展44-53
• 2.1 Col I 修飾物44-46
• 2.1.1 Col I 修飾鈦及其合金44-45
• 2.1.2 Col I 修飾羥基磷灰石（hydroxyapatite，HA）45-46
• 2.2 CS 修飾物46-47
• 2.2.1 CS 修飾鈦及其合金46-47
• 2.2.2 CS 修飾 HA47
• 2.3 RGD 肽修飾物47-49
• 2.3.1 RGD 肽修飾鈦及其合金48
• 2.3.2 RGD 修肽飾 HA48-49
• 2.4 其他細胞外基質(zhì)成分修飾物49
• 2.5 展望49-50
• 參考文獻50-53
• 致謝53-54
• 導師簡介54-55
• 作者簡介55-56
• 學位論文數(shù)據(jù)集56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李旭升,胡蘊玉,范紅斌,白建萍,呂榮,騰勇,王軍;新型快速成形的三維多孔支架材料構(gòu)建組織工程軟骨[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年11期

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  本文關(guān)鍵詞：精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（RGD）多肽修飾多孔鉭材料對軟骨細胞粘附性影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：389884