本文關(guān)鍵詞：脫細(xì)胞半月板細(xì)胞外基質(zhì)的制備及其對半月板纖維軟骨細(xì)胞的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模喝绾喂δ苄灾亟〒p傷的半月板是再生醫(yī)學(xué)面臨的一個(gè)巨大挑戰(zhàn),本研究的目的：1.建立通過濕法粉碎、差速離心的方法制備脫細(xì)胞半月板細(xì)胞外基質(zhì)(decellularized meniscal extracellular matrix, MECM)生物材料的方法;2.觀察兔半月板纖維軟骨細(xì)胞(Meniscal Fibrochondrocytes, MFC)體外單層擴(kuò)增培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞形態(tài)以及表型的變化;3.體外檢測MECM對傳代MFC (P3)增殖以及再分化的影響。實(shí)驗(yàn)方法：1.通過濕法粉碎、差速離心,將豬的半月板組織制備成MECM,并且評價(jià)MECM的理化學(xué)特性;2.兔的MFC在單層擴(kuò)增培養(yǎng)的條件下,觀察其細(xì)胞外形及其基因表達(dá)特點(diǎn)隨著傳代次數(shù)增多所發(fā)生的變化：3.將傳代的MFC (P3).分別種植在由硫酸軟骨素(chondroitin sulfate, CS)、MECM、MECM混合CS(比例為5：1)以及對照組(The control group, TCP,無修飾)不同方法修飾的蓋玻片表面,體外培養(yǎng)7天、14天,檢測其細(xì)胞黏附性,細(xì)胞活性,細(xì)胞增殖,細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的分泌以及特異性基因mRNA表達(dá)的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：由本方法制備的MECM能很好的保留半月板ECM成分,包括膠原(Collagen, COL)和糖胺多糖(glycosaminoglycans, GAG),并且較干凈的去除了細(xì)胞DNA物質(zhì)。MFC在單層培養(yǎng)的條件下經(jīng)過多次傳代,細(xì)胞由圓形的纖維軟骨細(xì)胞樣外形轉(zhuǎn)變?yōu)樯扉L形的纖維母細(xì)胞樣外形,并且可見COL Ⅰ mRNA表達(dá)的上調(diào)和COL Ⅱ mRNA表達(dá)的下調(diào)。通過CCK-8的檢測發(fā)現(xiàn)MECM可以促進(jìn)傳代MFC (P3)的細(xì)胞增殖。MECM能夠維持半月板細(xì)胞的活性；促進(jìn)其黏附和細(xì)胞數(shù)量的增加：提高COL Ⅱ mRNA的表達(dá)水平(比TCP組高12倍,P0.05);增加GAG以及COL的分泌。番紅"O"(Safranine O, SO)以及甲苯胺藍(lán)(Toluidine Blue,TB)染色結(jié)果證實(shí),MECM修飾的表面可以促進(jìn)傳代MFC的再分化。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：該MECM制備方法能夠較好地保留天然半月板組織的ECM成分,去除細(xì)胞DNA物質(zhì)。兔MFC在單層擴(kuò)增培養(yǎng)的條件下發(fā)生了去分化的現(xiàn)象。MECM可以同時(shí)促進(jìn)傳代去分化MFC (P3)的細(xì)胞增殖以及再分化,因此MECM可能是未來組織工程(Tissue Engineering, TE)半月板支架材料中相當(dāng)有應(yīng)用前景的生物材料之一。
【關(guān)鍵詞】：半月板TE 細(xì)胞外基質(zhì) 纖維軟骨細(xì)胞 細(xì)胞增殖 再分化
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08;R687
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-19
• 參考文獻(xiàn)14-19
• 實(shí)驗(yàn)一 MECM材料的制備19-30
• 目的19
• 材料與方法19-23
• 結(jié)果23-27
• 討論27-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-30
• 實(shí)驗(yàn)二 兔MFC傳代培養(yǎng)的表型變化研究30-38
• 目的30
• 材料與方法30-33
• 結(jié)果33-35
• 討論35-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-38
• 實(shí)驗(yàn)三 MECM與傳代MFC之間相互作用的研究38-61
• 目的38
• 材料與方法38-43
• 結(jié)果43-55
• 討論55-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-61
• 縮略詞表61-63
• 文獻(xiàn)綜述63-96
• 摘要63-64
• 前言64-65
• 半月板組織結(jié)構(gòu)以及生物力學(xué)特性65-70
• 半月板損傷和膝關(guān)節(jié)OA的發(fā)展70-71
• 半月板損傷的分類及其治療策略71-72
• 半月板TE支架的研究進(jìn)展72-81
• 對未來半月板再生的展望81-82
• 結(jié)論82-83
• 參考文獻(xiàn)83-94
• 縮略詞表94-96
• 參加學(xué)術(shù)交流情況96-97
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況97-98
• 致謝98

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本文編號：385454