本文關鍵詞：脫細胞半月板細胞外基質的制備及其對半月板纖維軟骨細胞的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實驗目的：如何功能性重建損傷的半月板是再生醫(yī)學面臨的一個巨大挑戰(zhàn),本研究的目的：1.建立通過濕法粉碎、差速離心的方法制備脫細胞半月板細胞外基質(decellularized meniscal extracellular matrix, MECM)生物材料的方法;2.觀察兔半月板纖維軟骨細胞(Meniscal Fibrochondrocytes, MFC)體外單層擴增培養(yǎng)時細胞形態(tài)以及表型的變化;3.體外檢測MECM對傳代MFC (P3)增殖以及再分化的影響。實驗方法：1.通過濕法粉碎、差速離心,將豬的半月板組織制備成MECM,并且評價MECM的理化學特性;2.兔的MFC在單層擴增培養(yǎng)的條件下,觀察其細胞外形及其基因表達特點隨著傳代次數(shù)增多所發(fā)生的變化：3.將傳代的MFC (P3).分別種植在由硫酸軟骨素(chondroitin sulfate, CS)、MECM、MECM混合CS(比例為5：1)以及對照組(The control group, TCP,無修飾)不同方法修飾的蓋玻片表面,體外培養(yǎng)7天、14天,檢測其細胞黏附性,細胞活性,細胞增殖,細胞外基質(extracellular matrix, ECM)的分泌以及特異性基因mRNA表達的特點。實驗結果：由本方法制備的MECM能很好的保留半月板ECM成分,包括膠原(Collagen, COL)和糖胺多糖(glycosaminoglycans, GAG),并且較干凈的去除了細胞DNA物質。MFC在單層培養(yǎng)的條件下經過多次傳代,細胞由圓形的纖維軟骨細胞樣外形轉變?yōu)樯扉L形的纖維母細胞樣外形,并且可見COL Ⅰ mRNA表達的上調和COL Ⅱ mRNA表達的下調。通過CCK-8的檢測發(fā)現(xiàn)MECM可以促進傳代MFC (P3)的細胞增殖。MECM能夠維持半月板細胞的活性；促進其黏附和細胞數(shù)量的增加：提高COL Ⅱ mRNA的表達水平(比TCP組高12倍,P0.05);增加GAG以及COL的分泌。番紅"O"(Safranine O, SO)以及甲苯胺藍(Toluidine Blue,TB)染色結果證實,MECM修飾的表面可以促進傳代MFC的再分化。實驗結論：該MECM制備方法能夠較好地保留天然半月板組織的ECM成分,去除細胞DNA物質。兔MFC在單層擴增培養(yǎng)的條件下發(fā)生了去分化的現(xiàn)象。MECM可以同時促進傳代去分化MFC (P3)的細胞增殖以及再分化,因此MECM可能是未來組織工程(Tissue Engineering, TE)半月板支架材料中相當有應用前景的生物材料之一。
【關鍵詞】：半月板TE 細胞外基質 纖維軟骨細胞 細胞增殖 再分化
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08;R687
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-19
• 參考文獻14-19
• 實驗一 MECM材料的制備19-30
• 目的19
• 材料與方法19-23
• 結果23-27
• 討論27-28
• 結論28-29
• 參考文獻29-30
• 實驗二 兔MFC傳代培養(yǎng)的表型變化研究30-38
• 目的30
• 材料與方法30-33
• 結果33-35
• 討論35-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-38
• 實驗三 MECM與傳代MFC之間相互作用的研究38-61
• 目的38
• 材料與方法38-43
• 結果43-55
• 討論55-58
• 結論58-59
• 參考文獻59-61
• 縮略詞表61-63
• 文獻綜述63-96
• 摘要63-64
• 前言64-65
• 半月板組織結構以及生物力學特性65-70
• 半月板損傷和膝關節(jié)OA的發(fā)展70-71
• 半月板損傷的分類及其治療策略71-72
• 半月板TE支架的研究進展72-81
• 對未來半月板再生的展望81-82
• 結論82-83
• 參考文獻83-94
• 縮略詞表94-96
• 參加學術交流情況96-97
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況97-98
• 致謝98

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本文編號：385454