本文關(guān)鍵詞：絲素蛋白納米纖維和人角質(zhì)形成細(xì)胞在皮膚組織工程中的運(yùn)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著對(duì)皮膚損傷治療研究的進(jìn)展，組織工程皮膚是近年來研究的熱點(diǎn)，有著廣闊的臨床應(yīng)用前景。皮膚在面臨大面積燒傷或損壞時(shí)急需獲得大量的表皮覆蓋以促進(jìn)皮膚組織的再生與修復(fù)。絲素蛋白在兼顧其它生物材料的多種優(yōu)良特性的同時(shí)，更具有多層面可控性的特色，為皮膚組織工程提供了良好的生物材料。人角質(zhì)形成細(xì)胞來源于皮膚最外層的表皮層，表皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)為研究表皮分化機(jī)制奠定了厚實(shí)的基礎(chǔ)。本論文旨在利用絲素蛋白納米纖維和角質(zhì)形成細(xì)胞在體外構(gòu)建組織工程皮膚，從而探討其在皮膚組織損傷修復(fù)中的作用。本實(shí)驗(yàn)采用從外科手術(shù)廢棄的幼兒手指皮膚中提取人角質(zhì)形成細(xì)胞，利用絲素蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)的可調(diào)控性，通過角質(zhì)形成細(xì)胞體外三維培養(yǎng)體系檢驗(yàn)絲素蛋白支架材料，，進(jìn)一步分析角質(zhì)形成細(xì)胞與支架材料的相容性及其在皮膚損傷修復(fù)中的作用，為進(jìn)一步的研究和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 第一部分人角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定及其與絲素蛋白納米纖維膜材料相容性的研究 目的：從廢棄的幼兒六指皮膚中分離獲得角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和生物學(xué)特性的鑒定，并研究其與絲素蛋白納米纖維膜材料的相容性。 方法：應(yīng)用中性蛋白酶和胰蛋白酶聯(lián)合兩步消化法從廢棄幼兒六指皮膚中提取角質(zhì)形成細(xì)胞，采用人表皮細(xì)胞無血清培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)和傳代。RT-PCR和免疫熒光染色技術(shù)鑒定角質(zhì)形成細(xì)胞的標(biāo)志基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)。將角質(zhì)形成細(xì)胞接種在絲素蛋白納米纖維材料上，培養(yǎng)后取不同時(shí)間點(diǎn)在倒置顯微鏡下觀察，并通過掃描電鏡檢測(cè)細(xì)胞在材料上的黏附生長(zhǎng)以及細(xì)胞的增殖。 結(jié)果：人角質(zhì)形成細(xì)胞呈典型的上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)，排列規(guī)律，細(xì)胞邊界明顯，核清晰；RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，分離培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)角質(zhì)形成細(xì)胞標(biāo)志基因CK5、CK14和β1-intergin，免疫熒光染色結(jié)果證實(shí)其表達(dá)角蛋白CK5和CK14。角質(zhì)形成細(xì)胞接種在絲素蛋白納米纖維材料后，呈材料引導(dǎo)著細(xì)胞的黏附生長(zhǎng)和鋪展并 有效地增殖，可見有胞外基質(zhì)分泌，由此表明人角質(zhì)形成細(xì)胞能在體外良好地生長(zhǎng)，與絲素蛋白納米纖維材料有較好的相容性。 結(jié)論：成功建立人角質(zhì)形成細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)體系并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定，證明了其與絲素蛋白納米纖維材料具有良好的相容性，為進(jìn)一步研究絲素蛋白納米纖維材料在皮膚組織工程中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。 第二部分絲素蛋白納米纖維材料在表皮層皮膚組織三維氣液培養(yǎng)模型中的應(yīng)用及其在皮膚損傷修復(fù)中作用的研究 目的：建立表皮層皮膚組織三維氣液培養(yǎng)模型，在體外利用絲素蛋白納米纖維結(jié)合人角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚，并研究絲素蛋白納米纖維在皮膚組織損傷修復(fù)中的作用。 方法：采用鼠尾Ι型膠原建立表皮層皮膚組織三維氣液培養(yǎng)模型作為本研究的陽(yáng)性對(duì)照，再以絲素蛋白納米纖維膜為基質(zhì)進(jìn)行三維氣液培養(yǎng)，石蠟切片HE染色觀察角質(zhì)形成細(xì)胞在體外的分化。將絲素蛋白納米纖維作為表皮覆蓋物移植到裸鼠皮膚損傷處，觀察記錄創(chuàng)面修復(fù)情況并通過對(duì)移植區(qū)組織切片免疫熒光檢測(cè)材料在皮膚損傷修復(fù)中的作用。 結(jié)果：以絲素蛋白納米纖維膜為基質(zhì)進(jìn)行三維氣液培養(yǎng)后，角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)生了分層，當(dāng)使用厚度更�。�30-60μm）的材料后，細(xì)胞呈現(xiàn)更為分化的狀態(tài)。對(duì)裸鼠皮膚損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)表明，絲素蛋白納米纖維膜覆蓋的創(chuàng)面修復(fù)得更快更好；免疫熒光染色結(jié)果檢測(cè)出角蛋白CK10和CK14的表達(dá)，提示表皮層修復(fù)完好。 結(jié)論：絲素蛋白納米纖維可作為體外構(gòu)建組織工程皮膚的較理想材料，可將其作為表皮覆蓋物應(yīng)用于皮膚損傷修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：人角質(zhì)形成細(xì)胞 絲素蛋白納米纖維 三維氣液培養(yǎng) 皮膚組織工程 皮膚損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 研究背景11-25
• 參考文獻(xiàn)21-25
• 第一部分 人角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定及其與絲素蛋白納米纖維膜材料相容性的研究25-38
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 第二部分 絲素蛋白納米纖維材料在表皮層皮膚組織三維氣液培養(yǎng)模型中的應(yīng)用及其在皮膚損傷修復(fù)中作用的研究38-53
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 小結(jié)與展望53-54
• 研究生期間完成的論文54-55
• 本研究所獲的基金資助55-56
• 縮寫詞表56-57
• 致謝57-59

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：絲素蛋白納米纖維和人角質(zhì)形成細(xì)胞在皮膚組織工程中的運(yùn)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：384509