因外傷、感染、腫瘤等因素造成骨缺損是骨科臨床常見疾病。較小范圍的骨缺損可以由機體自身的再生得到修復(fù),大范圍骨缺損由于成骨細胞難以越過而不能正常愈合,若不采用適當(dāng)治療則最終僅由纖維組織充填,形成骨不連。而大范圍骨缺損的修復(fù)目前仍是臨床上難以完全解決的問題。目前常用的有自體骨移植、異體／異種骨移植、人工合成骨替代品等方法修復(fù)骨缺損,都有其優(yōu)缺點。骨組織工程學(xué)是利用組織工程原理對骨缺損進行修復(fù)和重建的一門學(xué)科,近年來,將種子細胞與特定支架材料復(fù)合,在體外構(gòu)建具有生命的活性組織工程化復(fù)合材料是骨組織工程學(xué)研究的熱點。本實驗根據(jù)骨組織工程學(xué)基本原理,培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞,成骨誘導(dǎo)后復(fù)合納米羥基磷灰石／聚酰胺66支架材料,植入裸鼠體內(nèi)觀察其成骨的情況,為進一步建立骨組織工程的動物模型及滿足治療骨缺損的臨床需要提供理論基礎(chǔ)。 第一章臍帶間充質(zhì)干細胞的提取、分離、純化增殖及生物學(xué)特性 目的研究探討人臍帶間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)、增殖方法,并研究其生物學(xué)特性,以期將其作為骨組織工程種子細胞。 方法取足月妊娠剖宮產(chǎn)健康胎兒的臍帶,D-Hank’s液充分洗滌,將臍帶剪碎至1mm3大小組織塊,運用膠原酶消化...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

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前言
第一章 人臍帶間充質(zhì)干細胞的提取、分離、純化增殖及生物學(xué)特性
    1.1 材料和方法
        1.1.1 材料、主要試劑和儀器
        1.1.2 實驗方法與步驟
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞的形態(tài)特征
        1.2.2 細胞表面抗原檢測結(jié)果
        1.2.3 細胞生長與增殖曲線
    1.3 討論
    1.4 結(jié)論
    附圖
第二章 人臍帶間充質(zhì)干細胞的體外成骨誘導(dǎo)分化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要試劑與儀器
        2.1.2 實驗方法與步驟
        2.1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 hUCMSCs成骨誘導(dǎo)后細胞形態(tài)特征及H-E染色表現(xiàn)
        2.2.2 堿性磷酸酶染色及含量測定
        2.2.3 鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色
        2.2.4 RT-PCR檢測OPN、OCN、ALP的mRNA的表達情況
        2.2.5 免疫組織化學(xué)及Western blotting檢測Ⅰ型膠原蛋白表達
    2.3 討論
    2.4 結(jié)論
    附圖
第三章 人臍帶間充質(zhì)干細胞與nHA/PA66復(fù)合支架生物相容性的體外實驗研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要試劑與儀器
        3.1.2 實驗方法與步驟
        3.1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞復(fù)合nHA/PA66支架材料觀察及支架理化性質(zhì)
        3.2.3 堿性磷酸酶定量檢測結(jié)果
        3.2.4 生長曲線測定
        3.2.5 nHA/PA66支架材料細胞粘附率測試結(jié)果
        3.2.6 細胞毒性測試結(jié)果
        3.2.7 RT-PCR檢測OPN、OCN、ALP結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 支架材料的研究現(xiàn)狀
        3.3.2 種子細胞與生物支架材料的生物相容性評價
    3.4 結(jié)論
    附圖
第四章 人臍帶間充質(zhì)干細胞復(fù)合nHA/PA66支架異位成骨作用的實驗研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料與主要試劑與儀器
        4.1.2 實驗方法與步驟
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 大體觀察
        4.2.2 組織學(xué)觀察:H-E染色及骨鈣素蛋白免疫組化結(jié)果
        4.2.3 電鏡掃描結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 結(jié)論
    附圖
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
讀博期間發(fā)表論文情況



本文編號：3811178