目的用攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）基因的慢病毒病毒載體轉(zhuǎn)染SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）,接種于納米羥基磷灰石/膠原/聚乳酸（nHAC/PLA）材料構(gòu)建組織工程骨,體外觀察成骨表達(dá)情況。 方法體外分離、培養(yǎng)SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,傳代培養(yǎng)后分為A、B、C組。A組為BMP-2和eGFP轉(zhuǎn)染組;B組為空慢病毒病毒載體轉(zhuǎn)染組;C組為未轉(zhuǎn)染組。取攜帶BMP-2和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP）的慢病毒（MOI=25pfu/cell）感染SD大鼠BMSCs。熒光顯微鏡下觀察eGFP的表達(dá),判斷感染效率及細(xì)胞生長情況。通過噻唑籃（MTT）和流式細(xì)胞儀（FCM）檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生長增殖活力及對細(xì)胞周期的影響。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、免疫組化和酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）檢測BMP-2蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染成功后接種于nHAC/PLA支架,構(gòu)建組織工程骨。堿性磷酸酶（ALP）檢測試劑盒檢測ALP活性,茜紅素染色檢了解成骨情況;掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架材料中的黏附、生長和合成分泌骨基質(zhì)的情況。 結(jié)果①經(jīng)密度梯度離心法分離、貼壁篩選、培養(yǎng)所獲的細(xì)胞,經(jīng)鑒定是鼠的BMSCs,... 

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
附圖
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文獻(xiàn)綜述
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3685560