基因活化基質(zhì)（gene activated matrix,GAM）是將可降解生物支架材料與質(zhì)粒DNA載體相結(jié)合,形成一種基因局部釋放系統(tǒng)。GAM既能夠提供一個具有一定機(jī)械強(qiáng)度、可降解的多孔支架供細(xì)胞長入,為種子細(xì)胞提供空間支持;又可以通過支架材料直接承載基因如質(zhì)粒DNA或基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的混合物,繼而局部轉(zhuǎn)染種子細(xì)胞,分泌促進(jìn)組織修復(fù)的生長因子,特異性誘導(dǎo)種子細(xì)胞的定向分化,最終促進(jìn)組織的再生。靜電紡絲是一種制備納米級纖維的方法。通過靜電紡絲制備的纖維膜具有比表面積高、孔隙率大等優(yōu)點(diǎn),類似于天然細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu),有利于細(xì)胞的粘附、生長、繁殖。傳統(tǒng)的靜電紡絲方法制備GAM,需將可降解高分子材料與包含質(zhì)粒的質(zhì)粒載體混合在一起。電紡過程中質(zhì)粒不可避免的會接觸到有機(jī)溶劑,這對質(zhì)粒的活性有一定影響。此外,混紡形成的納米纖維支架中的基因釋放較快,存在突釋效應(yīng)。本研究選擇同軸靜電紡絲方法來制備聚乳酸-羥基乙酸共聚物（poly lactic-co-glycolic acid,PLGA）與骨形成蛋白-2（Bone Morphogenetic Protein-2,BMP-2）質(zhì)粒微球的芯殼型纖維,構(gòu)建殼... 

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
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英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
實(shí)驗(yàn)一 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-BMP-2的構(gòu)建
    1 材料
        1.1 儀器
        1.2 試劑
        1.3 質(zhì)粒
    2 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 表達(dá)載體酶切、純化
        2.3 目的基因片段的獲取
        2.4 重組質(zhì)粒的連接
        2.5 大腸桿菌感受態(tài)制備
        2.6 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.7 重組質(zhì)粒的大量擴(kuò)增、提取
        2.8 大量提取的重組質(zhì)粒純度及濃度測量
    3 結(jié)果
        3.1 表達(dá)載體酶切鑒定結(jié)果
        3.2 目的基因PCR結(jié)果鑒定
        3.3 重組質(zhì)粒PCR結(jié)果鑒定
        3.4 測序鑒定結(jié)果
        3.5 大量提取的重組質(zhì)粒純度及濃度
    4 討論
實(shí)驗(yàn)二 同軸電紡芯-殼型pEGFP-N1-BMP-2/PLGA的制備及表征
    1 材料
        1.1 儀器
        1.2 試劑、材料
    2 方法
        2.1 同軸電紡PEI/PLGA纖維的制備及檢測
        2.2 質(zhì)粒微球的制備
        2.3 同軸靜電紡絲pEGFP-N1-BMP-2/PLGA纖維及檢測
        2.4 統(tǒng)計(jì)方法
    3 結(jié)果
        3.1 同軸電紡PEI/PLGA纖維
        3.2 同軸電紡pEGFP-N1-BMP-2/PLGA纖維
    4 討論
實(shí)驗(yàn)三 同軸電紡pEGFP-N1-BMP-2/PLGA體外轉(zhuǎn)染牙周膜干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
    1 儀器與材料
        1.1 儀器
        1.2 材料與試劑
    2 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 牙周膜干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定
        2.3 牙周膜干細(xì)胞與pEGFP-N1-BMP-2/PLGA電紡纖維膜的生物相容性
        2.4 pEGFP-N1-BMP-2/PLGA轉(zhuǎn)染牙周膜干細(xì)胞及檢測
        2.5 統(tǒng)計(jì)方法
    3 結(jié)果
        3.1 牙周膜干細(xì)胞的組織學(xué)觀察
        3.2 牙周膜干細(xì)胞的流式檢測相關(guān)抗原鑒定
        3.3 牙周膜干細(xì)胞的克隆形成率
        3.4 牙周膜干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)
        3.5 牙周膜干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)
        3.6 牙周膜干細(xì)胞與pEGFP-N1-BMP-2/PLGA電紡纖維膜的生物相容性
        3.7 轉(zhuǎn)染情況
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷和研究成果
致謝



本文編號：3683812