本文關(guān)鍵詞：基于新型納米材料修飾的甲胎蛋白免疫傳感器的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 腫瘤標志物檢測，對健康體檢發(fā)現(xiàn)腫瘤早期有重要意義，它是反映腫瘤存在的化學(xué)類物質(zhì)，人血清中腫瘤標志物水平的上升與某些腫瘤直接相關(guān)。目前臨床上常用于檢測腫瘤標志物的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、放射免疫法以及電化學(xué)發(fā)光法。然而，這些方法有一定的局限性，如具有放射性危害，分析時間長，復(fù)雜的洗滌程序，昂貴而笨重的儀器。生物傳感器，尤其是電流型免疫傳感器因其操作方便，制備簡單，分析時間快，靈敏度高而備受關(guān)注。因此，，研制簡單、快速、靈敏的電流型免疫傳感器對臨床腫瘤標志物的快速檢測具有重要意義。 目的 本文以甲胎蛋白（AFP）為檢測模型，旨在構(gòu)建簡單、快速、靈敏的用于腫瘤標志物檢測的電流型免疫傳感器，并對其檢測性能進行了研究。 材料與方法 1．將氧化銦錫半導(dǎo)體玻璃(ITO)，切割成3mm×20mm條形玻片，依次用丙酮、二氯甲烷、蒸餾水超聲清洗，將玻片的一端3mm×3mm作為有效工作面積。 2．使用層層電沉積的方法組裝免疫傳感器，首先在已清洗干凈的ITO玻片表面依次電沉積納米金顆粒（nano-Au）和普魯士藍（PB）和nano-Au，然后吸附固定甲胎蛋白抗體（anti-AFP），并用BSA封閉電極表面納米金可能存在的非特異性結(jié)合位點。 3.用循環(huán)伏安法考察了不同檢測條件對傳感器的影響，如：檢測液pH值、孵育溫度和孵育時間。 4.在最佳檢測條件下，使用循環(huán)伏安法對免疫傳感器的檢測性能及特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進行了研究。 5．利用MWNTs-PB-CHIT納米復(fù)合物良好的導(dǎo)電性、大的比表面積、強的吸附性和良好的生物相容性，結(jié)合蛋白A定向固定抗體，通過層層自組裝的方法制備了靈敏的、穩(wěn)定性好的電流型免疫傳感器。 6.用循環(huán)伏安法考察了不同檢測條件對傳感器的影響，如：檢測液pH值、孵育溫度和孵育時間。 7.在最佳檢測條件下，使用循環(huán)伏安法對免疫傳感器的檢測特性及特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進行了研究。 結(jié)果 1.用循環(huán)伏安法對免疫傳感器的組裝過程進行表征，結(jié)果表明BSA/anti-AFP/nano-Au/PB/nano-Au/TIO免疫傳感器制備成功。 2.循環(huán)伏安掃描結(jié)果表明，BSA/anti-AFP/nano-Au/PB/nano-Au/TIO免疫傳感器的最佳檢測條件為：緩沖液pH值為5.5，孵育溫度為25℃，孵育時間為8min。 3.在最佳檢測條件下，層層電沉積法制備的免疫傳感器BSA/anti-AFP/nano-Au/PB/nano-Au/TIO線性范圍為0.25～300ng/mL，檢測下限為0.04ng/mL。該傳感器具有良好的特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性，電極的批內(nèi)響應(yīng)電流為-17.47±0.85μA，變異系數(shù)為4.86%；該傳感器于PBS溶液中連續(xù)掃描100圈，其響應(yīng)電流下降2.49%，且第一圈掃描響應(yīng)電流是-19.64μA，放置30天后掃描，其響應(yīng)電流下降7.97%。 4.用循環(huán)伏安法對層層自組裝免疫傳感器的組裝過程進行表征，實驗結(jié)果表明BSA/anti-AFP/PA/MWNTs-PB-CHIT/nano-Au/ITO免疫傳感器組裝成功。 5.循環(huán)伏安掃描結(jié)果表明，BSA/anti-AFP/PA/MWNTs-PB-CHIT/nano-Au/ITO免疫傳感器的最佳檢測條件為：緩沖液pH值為6.5，孵育溫度為25℃，孵育時間為6min。 6.實驗結(jié)果表明：在最佳檢測條件下，層層自組裝法制備的免疫傳感器對甲胎蛋白標準品的檢測線性范圍為1.0～250.0ng/mL，檢測下限為0.5ng/mL。免疫傳感器也具有良好的特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性，電極的批內(nèi)響應(yīng)電流為-20.52±0.51μA，變異系數(shù)為2.48%。該傳感器于PBS溶液中連續(xù)掃描100圈，其響應(yīng)電流下降2.24%，且第一圈掃描響應(yīng)電流是-24.98μA，放置30天后，其響應(yīng)電流下降3.56%。 結(jié)論 1．本文采用層層電沉積的方法和層層自組裝的方法分別制備了用于AFP檢測的電化學(xué)免疫傳感器BSA/anti-AFP/nano-Au/PB/nano-Au/TIO和BSA/anti-AFP/PA/MWNTs-PB-CHIT/nano-Au/ITO，所制備的傳感器檢測快速、靈敏、具有良好的特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性。 2．與BSA/anti-AFP/nano-Au/PB/nano-Au/TIO免疫傳感器相比，基于MWNTs-PB-CHIT納米復(fù)合物制備的BSA/anti-AFP/PA/MWNTs-PB-CHIT/nano-Au/ITO免疫傳感器，制備過程更加簡單，響應(yīng)電流信號明顯增強，傳感器的穩(wěn)定性進一步提高，這主要歸因于MWNTs-PB-CHIT納米復(fù)合物具有電子傳輸能力強、吸附性能好、穩(wěn)定性和生物相容性好的優(yōu)點。 3．本文所建立的電化學(xué)免疫傳感器模型為其他腫瘤標志物的檢測提供一種新方法新思路，有望彌補現(xiàn)有常規(guī)檢測方法存在的不足，滿足臨床快速診斷的需要，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：甲胎蛋白 電流型免疫傳感器 納米復(fù)合物 層層自組裝 層層電沉積
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-12
• 第二章 層層電沉積納米金/普魯士藍組裝甲胎蛋白免疫傳感器的研究12-32
• 2.1 實驗材料12-13
• 2.2 實驗方法13-16
• 2.3 結(jié)果16-29
• 2.4 討論29-32
• 第三章 基于納米金及多壁碳納米管-普魯士藍-殼聚糖納米復(fù)合材料的信號增強型甲胎蛋白免疫傳感器的研究32-48
• 3.1 實驗材料32
• 3.2 實驗方法32-36
• 3.3 結(jié)果36-45
• 3.4 討論45-48
• 全文總結(jié)48-49
• 參考文獻49-53
• 文獻綜述53-75
• 參考文獻66-75
• 研究生期間參與撰寫的論文75-76
• 致謝76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：基于新型納米材料修飾的甲胎蛋白免疫傳感器的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：362876