發(fā)布時間：2022-02-11 13:31

　　目的:體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）和內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）,在此基礎(chǔ)上探討應(yīng)用大鼠骨髓間充干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞作為種子細(xì)胞、聚乳酸作為支架材料復(fù)合構(gòu)建組織工程骨的可行性。方法:研究目的通過以下四個實驗來實現(xiàn):1.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)和向成骨細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化（1）大鼠骨髓中分離、培養(yǎng)獲得具有多向分化潛能的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。（2）取第二代（P2）細(xì)胞為實驗組,應(yīng)用成骨誘導(dǎo)液將間充干細(xì)胞向成骨細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化,以未誘導(dǎo)組為對照組,采用茜紅素染色觀察培養(yǎng)細(xì)胞的鈣結(jié)節(jié)的形成,以及定量檢測培養(yǎng)細(xì)胞堿性磷酸酶的動態(tài)變化2.體外分離培養(yǎng)和鑒定大鼠骨髓來源的晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞（1）大鼠骨髓中分離、培養(yǎng)獲得晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞（2）通過流式細(xì)胞檢測技術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測細(xì)胞表型,鑒定所獲得的培養(yǎng)細(xì)胞為晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞3.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與大鼠骨髓來源的晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)復(fù)合聚乳酸支架材料體外構(gòu)建組織工程骨的實驗研究（1）分別獲得p2代BMSCs,經(jīng)成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)5

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

鈣結(jié)節(jié)茜紅素染色A：誘導(dǎo)組；B：非誘導(dǎo)組鈣結(jié)(×40)

從骨髓液中分離出的單個核細(xì)胞經(jīng)過48h培養(yǎng)，首次換液，吸取培養(yǎng)液，連同未貼壁的細(xì)胞棄去，可見少量梭形或多角形貼壁細(xì)胞，形態(tài)類似成纖維細(xì)胞，混有少量圓形血細(xì)胞(圖2-1)，為原代(P0)細(xì)胞。原代細(xì)胞生長緩慢，隨培養(yǎng)時間的延長，梭形貼壁細(xì)胞增殖明顯，圓形血細(xì)胞隨換液逐漸去除，形成形態(tài)不等的細(xì)胞克隆。培養(yǎng)14天左右局部細(xì)胞匯合可達(dá)80%～90%，匯合細(xì)胞形態(tài)均一，呈梭形 (圖2-2) 或平行排列（圖2-3）。細(xì)胞增殖迅速，可穩(wěn)定傳代， 子代細(xì)胞單層生長， 緊密結(jié)合， 成“ 鋪路石”樣（圖2-4）

隨培養(yǎng)時間的延長，梭形貼壁細(xì)胞增殖明顯，圓形血細(xì)胞隨換液逐漸去除，形成形態(tài)不等的細(xì)胞克隆。培養(yǎng)14天左右局部細(xì)胞匯合可達(dá)80%～90%，匯合細(xì)胞形態(tài)均一，呈梭形 (圖2-2) 或平行排列（圖2-3）。細(xì)胞增殖迅速，可穩(wěn)定傳代， 子代細(xì)胞單層生長， 緊密結(jié)合， 成“ 鋪路石”樣（圖2-4）， 增殖力旺盛， 符合晚期EPC 形態(tài)特征。3.2 流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果重新接種后3天的貼壁細(xì)胞CD34陽性率達(dá)到68%(圖2-5)。3.3 免疫細(xì)化學(xué)染色結(jié)果：培養(yǎng)21天的子代細(xì)胞vWF免疫細(xì)胞化學(xué)染色(圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3620368