C反應(yīng)蛋白是炎癥的客觀制造者之一,血清中CRP的濃度在感染、組織損傷或其他炎癥條件下會增加上千倍,而且CRP是心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素。因此,檢測和控制CRP水平對臨床感染性疾病和心血管疾病的治療至關(guān)重要。目前,用于CRP測定的方法有乳膠凝集法、單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法、膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和時(shí)間分辨熒光免疫層析法等。這些方法存在一些缺點(diǎn)如耗時(shí)耗力、靈敏度低等,所以探索一種快速、簡便、可靠的CRP檢測方法具有重要的預(yù)防和治療意義。本研究以生物化學(xué)、材料化學(xué)、納米科學(xué)、有機(jī)化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等知識為理論指導(dǎo),基于新型多功能磁性納米材料平臺,建立了一種新型的檢測方法,用于在液體中無標(biāo)記特異性檢測和收集急性炎癥與心血管疾病標(biāo)記物C反應(yīng)蛋白。免疫磁珠是由磁珠表面結(jié)合免疫配基制成的,用磁性納米材料作為固相,在其表面包裹高分子層,最后通過修飾,共價(jià)交聯(lián)免疫配基形成的。本研究用活化劑EDC/NHS活化羧基磁珠表面的羧基基團(tuán),在羧基磁珠表面固定CRP抗體,制備免疫磁珠,搭建新型多功能磁性納米材料平臺,檢測CRP蛋白。本研究首先研究偶聯(lián)液MES的p H值、活化... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

C反應(yīng)蛋白的X-射線晶體結(jié)構(gòu)[7]

哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文-14-低成本感染性疾病診斷的關(guān)鍵。在本課題中，由于多功能磁性納米材料上可以吸附大量信號標(biāo)記，這將給蛋白質(zhì)分析的靈敏度帶來巨大提升。圖1-2為本文的技術(shù)路線圖，主要分為新型多功能磁性納米材料平臺制備和CRP檢測方法的建立兩部分。圖1-2本文技術(shù)路線圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文-24-2.4結(jié)果討論2.4.1偶聯(lián)液的優(yōu)化取4個(gè)EP管，取3mg羧基磁珠加入1.5mLEP管中后，以4種不同pH值的0.01MMES偶聯(lián)液作為偶聯(lián)反應(yīng)體系，分別為pH=4.5、pH=5.5、pH=6.5、pH=7，活化反應(yīng)時(shí)間0min，活化劑為EDC溶液，抗體加入量為50μg，以抗體加入量為0μg作為空白組，偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)，均做三次平行實(shí)驗(yàn)，取平均值，比較最終抗體的偶聯(lián)量。通過BCA試劑盒在OD562nm下制定蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測免疫磁珠偶聯(lián)的蛋白質(zhì)含量，然后算出抗體的偶聯(lián)量。如圖2-1所示，在同等條件下pH=6.5的MES的抗體偶聯(lián)量最高，pH=7時(shí)，偶聯(lián)液效果大大降低，所以選擇pH=6.5的MES作為偶聯(lián)液。圖2-1不同pH偶聯(lián)液的抗體偶聯(lián)量2.4.2活化劑的優(yōu)化取3個(gè)EP管，取3mg羧基磁珠加入1.5mLEP管中后，以3種不同的活化方式作為偶聯(lián)反應(yīng)體系，分別為無活化劑、EDC、EDC/NHS，偶聯(lián)液為pH=6.5MES，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3592115