角膜位于眼球的最表面，因直接與外界接觸故易受到損傷或感染，一旦受到損傷和發(fā)生病變，就會引起角膜混濁，造成視力的減退甚至喪失。角膜病是我國主要的致盲病之一，僅次于白內(nèi)障，我國現(xiàn)有角膜病盲患者近500萬人，而全世界現(xiàn)有角膜病盲患者近6000萬人，其中大部分是由于角膜基質(zhì)異常而引起的，而且還在逐年遞增。角膜病尤其是角膜盲不僅給患者個人帶來巨大的痛苦，在生活上還需要家人等的照顧，給家庭和社會帶來了巨大的經(jīng)濟負擔。目前，治療角膜盲的唯一有效方法就是進行角膜移植，但由于角膜供體的嚴重短缺，無法滿足現(xiàn)有眾多角膜病盲患者治療的需要。近年來，角膜組織工程技術(shù)的興起使體外重建出組織工程人角膜成為可能，而體外重建的組織工程人角膜基質(zhì)，作為捐獻角膜的替代物，已成為眾多角膜病盲患者通過角膜移植而復(fù)明的唯一希望。組織工程人角膜基質(zhì)的體外重建急需解決足量種子細胞的來源和理想生物相容性載體支架的制備問題。本實驗室通過多年研究，已建立了多個非轉(zhuǎn)染人角膜基質(zhì)細胞系，初步成功解決了種子細胞的來源問題，并初步建立了脫細胞豬角膜基質(zhì)制備的技術(shù)工藝，本文擬在已有技術(shù)工藝的基礎(chǔ)上，通過改進和優(yōu)化利用豬角膜基質(zhì)制備出脫細胞豬角膜基質(zhì)... 

【文章來源】：中國海洋大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 角膜與組織工程
        1.1 角膜的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2 組織工程的興起與研究要素
    2 組織工程角膜種子細胞的研究進展
        1.1 人角膜基質(zhì)細胞
        1.2 人骨髓間充質(zhì)干細胞
        1.3 人脂肪源性干細胞
        1.4 人皮膚成纖維細胞
    2 組織工程角膜載體支架的研究進展
        2.1 脫細胞豬角膜基質(zhì)
        2.2 膠原及其復(fù)合材料
        2.3 絲素蛋白
        2.4 殼聚糖
        2.5 纖維蛋白
        2.6 聚羥基乙酸
    3 組織工程角膜基質(zhì)體外重建的研究進展
    4 本文的研究目的與意義
        4.1 研究目的
        4.2 研究意義
第二章 非轉(zhuǎn)染人角膜基質(zhì)細胞系的體外培養(yǎng)與鑒定
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要儀器
        1.3 藥品與耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 人角膜基質(zhì)細胞的復(fù)蘇及體外擴增培養(yǎng)
            2.1.1 人角膜基質(zhì)細胞的復(fù)蘇
            2.1.2 人角膜基質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)
        2.2 人角膜基質(zhì)細胞生長特性
        2.3 人角膜基質(zhì)細胞染色體分析
        2.4 人角膜基質(zhì)細胞免疫細胞化學檢測
    3 結(jié)果
        3.1 人角膜基質(zhì)細胞的細胞形態(tài)觀察
        3.2 人角膜基質(zhì)細胞的生長特性
        3.3 人角膜基質(zhì)細胞的染色體分析
        3.4 人角膜基質(zhì)細胞的免疫細胞化學檢測
            3.4.1 人角膜基質(zhì)細胞標志蛋白的檢測
            3.4.2 人角膜基質(zhì)細胞膜連接蛋白的檢測
            3.4.3 人角膜基質(zhì)細胞膜功能蛋白的檢測
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第三章 脫細胞豬角膜基質(zhì)載體支架的制備
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要儀器
        1.3 藥品與耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 脫細胞豬角膜基質(zhì)載體支架的制備
        2.2 石蠟切片
        2.3 HE 染色
        2.4 冰凍切片
        2.5 DAPI 染色
        2.6 透射電鏡觀察
        2.7 透光率
        2.8 孔隙率
        2.9 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 脫細胞效果
        3.2 超微結(jié)構(gòu)觀察
        3.3 透明度與透光率
        3.4 孔隙率
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第四章 脫細胞豬角膜基質(zhì)載體支架的生物相容性研究
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要儀器
        1.3 藥品與耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 人角膜基質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)
        2.2 細胞毒性評價（MTT）
        2.3 注射接種
        2.4 冰凍切片免疫細胞化學檢測
    3 結(jié)果
        3.1 細胞活力檢測
        3.2 形態(tài)學觀察
        3.3 免疫細胞化學檢測
            3.3.1 人角膜基質(zhì)細胞標志蛋白的檢測
            3.3.2 人角膜基質(zhì)細胞膜連接蛋白的檢測
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第五章 組織工程人角膜基質(zhì)的體外重建及鑒定
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要儀器
        1.3 藥品與耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 DiI 熒光標記人角膜基質(zhì)細胞后注射接種細胞
        2.2 石蠟切片
        2.3 HE 染色
        2.4 冰凍切片
        2.5 DiI 熒光觀察及免疫細胞化學檢測
        2.6 透射電鏡觀察
    3 結(jié)果
        3.1 組織工程人角膜基質(zhì)的形態(tài)學觀察
        3.2 組織工程人角膜基質(zhì)的 DiI 熒光檢測
        3.3 組織工程人角膜基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)的檢測
        3.4 組織工程人角膜基質(zhì)的免疫細胞化學的檢測
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第六章 組織工程人角膜基質(zhì)的新西蘭兔及比格犬板層角膜移植研究
    1 材料用品
        1.1 材料
        1.2 主要儀器
        1.3 藥品與耗材
        1.4 常用溶液配方
    2 方法
        2.1 前板層角膜移植術(shù)
        2.2 組織工程人角膜基質(zhì)移植效果檢測
            2.2.1 裂隙燈顯微鏡觀察與照相
            2.2.2 DiI 標記熒光檢測
            2.2.3 免疫細胞化學檢測
            2.2.4 石蠟切片 HE 染色
            2.2.5 透射電鏡觀察
    3 結(jié)果
        3.1 新西蘭兔術(shù)后在體檢測
        3.2 新西蘭兔移植眼角膜離體鑒定
            3.2.1 角膜形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察
            3.2.2 DiI 標記熒光檢測
            3.2.3 角膜超微結(jié)構(gòu)檢測
            3.2.4 角膜免疫細胞化學檢測檢測
                3.2.4.1 人角膜基質(zhì)細胞標志蛋白的檢測
                3.2.4.2 人角膜基質(zhì)細胞膜連接蛋白的檢測
                3.2.4.3 人角膜基質(zhì)細胞功能蛋白的檢測
        3.3 比格犬術(shù)后在體檢測
            3.3.1 比格犬術(shù)后角膜透明度檢測
            3.3.2 比格犬移植后角膜厚度檢測
            3.3.3 比格犬移植后眼壓檢測
    4 討論
    5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
個人簡歷
博士期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Establishment of an untransfected human corneal epithelial cell line and its biocompatibility with denuded amniotic membrane[J]. Ting-Jun Fan,Bin Xu,Jun Zhao,Hong-Shou Yang,Rui-Xin Wang,Xiu-Zhong Hu Key Laboratory for Corneal Tissue Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,Shandong Province,China.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2011(03)
[2]脂肪干細胞構(gòu)建組織工程化角膜基質(zhì)組織[J]. 鮑慧婧,鄒俊,尹爍,崔磊.  復(fù)旦學報(醫(yī)學版). 2010(06)
[3]組織工程人角膜內(nèi)皮在維持新西蘭兔角膜透明中的效果研究[J]. 樊廷俊,趙君,王晶,楊洪收,叢日山,楊秀霞,史偉云,王宜強.  山東大學學報(理學版). 2010(03)
[4]體外重建組織工程人角膜內(nèi)皮在新西蘭兔角膜內(nèi)皮移植中的應(yīng)用[J]. 樊廷俊,趙君,王晶,叢日山,楊秀霞,史偉云,王宜強.  國際眼科雜志. 2009(12)
[5]脫細胞豬角膜基質(zhì)體外支持皮膚細胞生長的實驗研究[J]. 林旭初,孫濤,金巖,惠延年,孟浩.  眼科新進展. 2009(08)
[6]脫細胞豬角膜基質(zhì)體外支持角膜上皮和基質(zhì)細胞的生長(英文)[J]. 林旭初,惠延年,孟浩,張永杰,金巖.  國際眼科雜志. 2008(07)
[7]組織工程角膜基質(zhì)的構(gòu)建[J]. 洪佳旭,徐建江,崔磊,尹爍.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(45)
[8]脫細胞豬角膜基質(zhì)的基底膜在修復(fù)兔角膜損傷中的作用[J]. 林旭初,惠延年,孟浩,張勇杰,金巖.  生物醫(yī)學工程與臨床. 2007(04)
[9]羊膜載體培養(yǎng)標記兔角膜內(nèi)皮細胞移植的研究[J]. 傅瑤,范先群,羅敏,陳蘋.  中華眼科雜志. 2006(10)
[10]重視我國角膜病的基礎(chǔ)研究[J]. 劉祖國,張慧.  中華眼科雜志. 2006(08)



本文編號：3591636