本文關鍵詞：纖維蛋白凝膠包埋下多孔支架上人真皮成纖維細胞的生物學特性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 組織工程支架給予細胞提供力學支撐、生長空間、化學及生物學刺激，引導細胞沿特定器官組織內部構型生長，以便合成具有特定功能的器官組織，因此支架的設計至關重要。本實驗主要研究體內共培養(yǎng)及體外共培養(yǎng)下細胞在不同孔徑支架上的形態(tài)學特性及體內培養(yǎng)情況支架孔徑的不同對細胞長入支架的影響。 第一部分纖維蛋白凝膠的包埋對不同孔徑支架上人真皮成纖維細胞形態(tài)學的影響 目的研究模擬體內共培養(yǎng)與體外共培養(yǎng)對不同孔徑支架上細胞生物學特性的影響。 方法實驗組：在自制正面觀模型F及側面觀模型L中，將分離純化的人真皮成纖維細胞分別和5種不同孔徑（600、400、270、170、100um）的鎳網共培養(yǎng)，并用纖維蛋白凝膠將其包埋來模擬細胞支架體內共培養(yǎng)。對照組：方法和實驗組相同，但無纖維蛋白凝膠的包埋。倒置相差顯微鏡被用來觀察人真皮成纖維細胞在鎳網的生長方式。用鬼筆環(huán)肽將兩組中細胞染色，并用共聚焦熒光顯微鏡觀察兩組中人真皮成纖維細胞中微絲骨架的排列。 結果在實驗組，無論鎳網孔徑的大小，人真皮成纖維細胞的主要生長方式為沿邊疊層生長，即細胞首先沿著網孔生長，然后隨著細胞的增殖，開始疊層排列，并繼續(xù)按鎳網構架生長；同時有部分細胞脫離支架長入周圍的纖維蛋白凝膠中。在對照組，隨著支架的孔徑的變小，細胞的主要生長方式由沿邊疊層生長逐漸轉變?yōu)榧軜蛏L，即細胞整個懸空，只有兩端和支架相連；同時并無細胞脫離支架生長。 結論體外培養(yǎng)情況下，隨著支架孔徑的變小，細胞的生長形態(tài)為沿支架構型生長向跨橋生長轉變。模擬體內培養(yǎng)情況下，細胞的生長形態(tài)并不隨支架孔徑的變化而變化，而主要沿支架構型生長。 第二部分纖維蛋白凝膠包埋下的孔徑的不同對成纖維細胞長入多孔立體支架的影響 目的通過纖維蛋白凝膠對支架的包埋來研究模擬體內培養(yǎng)下不同孔徑多孔立體支架對成纖維細胞生物學特性的影響。 方法應用鎳網及聚二甲基硅氧烷(PDMS)制作不同孔徑的多孔立體支架；純化培養(yǎng)成纖維細胞并種植于支架的周圍，并用纖維蛋白凝膠包埋，根據鎳網孔徑設置實驗組及空白對照組。給予細胞DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)染色及鬼筆環(huán)肽染色,并用倒置相差顯微鏡及共聚焦顯微鏡下觀察，記錄細胞遷延長度并繪制細胞遷延曲線，記錄細胞穿網后細胞數目并對比。 結果形態(tài)學觀察：大部分成纖維細胞以觸足的形式和支架接觸，然后細胞及其內部的微絲骨架按照支架的構型生長排列，當細胞的增殖到一定的程度后開始出現大量穿孔現象；少部分的成纖維細胞可直接穿過支架上的孔隙。DAPI染色示：各組細胞核形態(tài)正常，核質均染，未見明顯凋亡及壞死細胞。細胞遷延曲線示：實驗組中細胞遷延速度大于對照組，不同孔徑多孔立體支架內細胞遷延速度相差不大；當細胞遇到鎳網后細胞遷延會出現阻滯，呈現為平臺期。不同孔徑支架細胞穿網數目比較無統計學意義（P0.05）。 結論模擬體內培養(yǎng)的情況下，細胞會首先依附到支架上生長，而不是直接穿孔長入支架，當細胞的數目增殖到一定程度時便會脫離支架，出現穿孔現象。細胞在三維多孔支架上內穿行的速度和支架孔徑的大小無關，而和細胞在支架上遷延的速度及細胞增殖的速度相關。
【關鍵詞】：組織工程 支架 纖維蛋白凝膠 成纖維細胞
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 參考文獻12-14
• 第一部分 纖維蛋白凝膠的包埋對不同孔徑支架上人真皮成纖維細胞形態(tài)學的影響14-23
• 1.材料14-15
• 2.方法15-17
• 5 結果17-19
• 6.討論19-21
• 參考文獻21-23
• 第二部分 纖維蛋白凝膠包埋下的孔徑的不同對成纖維細胞長入多孔立體支架的影響23-32
• 1 材料23
• 2.方法23-25
• 3.結果25-28
• 4.討論28-31
• 參考文獻31-32
• 結論32-33
• 綜述33-47
• 參考消息40-47
• 攻讀碩士學位期間研究成果47-48
• 致謝48-49

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 許國華;蔡舒;于顯著;袁文;葉曉健;呂宏;賈連順;李家順;;納米磷酸鈣復合骨支架體內降解的實驗研究[J];稀有金屬材料與工程;2008年S1期

2 閆玉華,周文娟,李世普,萬濤;組織工程基質材料研究進展[J];國外醫(yī)學.生物醫(yī)學工程分冊;2001年04期

3 王生林 ,徐彥飛;自擬升清降濁止癇湯治療癇證68例[J];國醫(yī)論壇;2003年01期

4 王常勇,呂雙紅;組織工程種子細胞的研究進展[J];基礎醫(yī)學與臨床;2001年06期

5 吳國明;周輝;;纖維蛋白膠在骨科中的應用及前景展望[J];世界中西醫(yī)結合雜志;2010年03期

6 王身國;組織工程細胞支架及其相關技術研究[J];現代康復;2001年16期

7 王佳寧;顧其勝;;纖維蛋白在組織工程載體構建方面的應用[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年36期

8 徐冠華;崔志明;黃鎮(zhèn);孫敏;李衛(wèi)東;保國鋒;孫郁雨;王玲玲;朱樂銀;崔穎;;纖維蛋白凝膠與大鼠嗅鞘細胞的生物相容性[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年47期

9 謝青松;許信龍;魏曉捷;傅小君;潘紅松;李立新;;組織工程脊髓支架材料:聚乳酸-羥基乙酸最佳孔徑的篩選[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年03期

10 吳曉萍;曾耀英;;重組hFGF-10腺病毒促進角質形成細胞增殖[J];中國病理生理雜志;2007年02期

  本文關鍵詞：纖維蛋白凝膠包埋下多孔支架上人真皮成纖維細胞的生物學特性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：356444