絲素蛋白是一種天然高分子纖維蛋白,從蠶繭中提取獲得,含有豐富的氨基酸,具備良好的生物相容性、親和性和可降解性能等。絲素肽是由絲素蛋白水解所得,水解過(guò)程使其結(jié)構(gòu)發(fā)生了破壞,其有效價(jià)值得以充分體現(xiàn)。隨著絲素肽的應(yīng)用的不斷開(kāi)發(fā),應(yīng)用愈加廣泛,不同領(lǐng)域?qū)z素肽的要求也不盡相同。本課題以均分子量作為指標(biāo)制備不同的絲素肽,以體外培養(yǎng)細(xì)胞系人肝癌細(xì)胞HepG2作為模型,對(duì)三組絲素肽可能產(chǎn)生的對(duì)細(xì)胞的作用影響及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步研究,為以后工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)絲素肽提供檢測(cè)指標(biāo),也為其應(yīng)用方向選擇提供思路。本課題首先對(duì)絲素蛋白和絲素肽的細(xì)胞毒性進(jìn)行初步研究,結(jié)果顯示絲素蛋白無(wú)細(xì)胞毒性,而酶解后的絲素肽具有一定的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用。為了進(jìn)一步探究絲素肽對(duì)細(xì)胞的作用,采用卷式膜制得均分子量不同的三組絲素肽SFPⅠ、SFPⅡ、SFPⅢ（Mn=1531Da、1398Da和1134Da）為后續(xù)研究做準(zhǔn)備。采用MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)三組絲素肽對(duì)HepG2細(xì)胞的活力影響,同時(shí)選出合適的受試濃度做后續(xù)研究;細(xì)胞凋亡檢測(cè)采用Hoechst 33258熒光染色和流式Annexin V/PI雙染法,凋亡因子含量測(cè)定和熒光定量PCR檢... 

【文章來(lái)源】：重慶理工大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡觀(guān)察SF(A)與SFP（B）處理后HepG2細(xì)胞Fig.2.2FluorescencemicroscopeobservationofHepG2cellstreatedwithSF(A)andSFP(B)

采用考馬斯亮藍(lán)染色液室溫染色 30min，然后條帶后取出并拍照。透色譜法檢測(cè)絲素肽分子量樣品 SFPⅠ、SFPⅡ、SFPⅢ分別溶解于蒸餾水中，配制成，然后過(guò)濾。流動(dòng)相為 0.1N NaNO3+0.06%NaN3水溶液 0.6mL/min，柱溫 35℃。與討論量不同的三組絲素肽為制得的均分子量不同的三組絲素肽 SFPⅠ、SFPⅡ、SF

圖 3.2 三組絲素肽 SDS-PAGE 電泳圖S-PAGE electrophoresis of three groups of silk fib 蛋白凝膠電泳圖（圖 3.2）可知，制得的子量區(qū)間。SFP Ⅰ在 17KD 以下分子量區(qū)間 以下的分子量區(qū)間范圍均有分布，而 SFP確實(shí)制得了均分子量不同的三組絲素肽。分子量的測(cè)定C）是測(cè)定分子量和其分布最常用的快速有。其色譜柱內(nèi)填充的是多孔性填料（凝膠孔和通道。當(dāng)分析的樣品通過(guò)溶劑進(jìn)入色，較大的分子只進(jìn)入較大孔中，而較小的分，不同大小的分子就得到了分離，較大的分

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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