絲素蛋白是一種天然高分子纖維蛋白,從蠶繭中提取獲得,含有豐富的氨基酸,具備良好的生物相容性、親和性和可降解性能等。絲素肽是由絲素蛋白水解所得,水解過程使其結(jié)構(gòu)發(fā)生了破壞,其有效價值得以充分體現(xiàn)。隨著絲素肽的應(yīng)用的不斷開發(fā),應(yīng)用愈加廣泛,不同領(lǐng)域?qū)z素肽的要求也不盡相同。本課題以均分子量作為指標制備不同的絲素肽,以體外培養(yǎng)細胞系人肝癌細胞HepG2作為模型,對三組絲素肽可能產(chǎn)生的對細胞的作用影響及相關(guān)機制進行初步研究,為以后工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)絲素肽提供檢測指標,也為其應(yīng)用方向選擇提供思路。本課題首先對絲素蛋白和絲素肽的細胞毒性進行初步研究,結(jié)果顯示絲素蛋白無細胞毒性,而酶解后的絲素肽具有一定的抑制細胞生長作用。為了進一步探究絲素肽對細胞的作用,采用卷式膜制得均分子量不同的三組絲素肽SFPⅠ、SFPⅡ、SFPⅢ（Mn=1531Da、1398Da和1134Da）為后續(xù)研究做準備。采用MTT細胞毒性實驗檢測三組絲素肽對HepG2細胞的活力影響,同時選出合適的受試濃度做后續(xù)研究;細胞凋亡檢測采用Hoechst 33258熒光染色和流式Annexin V/PI雙染法,凋亡因子含量測定和熒光定量PCR檢... 

【文章來源】：重慶理工大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡觀察SF(A)與SFP（B）處理后HepG2細胞Fig.2.2FluorescencemicroscopeobservationofHepG2cellstreatedwithSF(A)andSFP(B)

采用考馬斯亮藍染色液室溫染色 30min，然后條帶后取出并拍照。透色譜法檢測絲素肽分子量樣品 SFPⅠ、SFPⅡ、SFPⅢ分別溶解于蒸餾水中，配制成，然后過濾。流動相為 0.1N NaNO3+0.06%NaN3水溶液 0.6mL/min，柱溫 35℃。與討論量不同的三組絲素肽為制得的均分子量不同的三組絲素肽 SFPⅠ、SFPⅡ、SF

圖 3.2 三組絲素肽 SDS-PAGE 電泳圖S-PAGE electrophoresis of three groups of silk fib 蛋白凝膠電泳圖（圖 3.2）可知，制得的子量區(qū)間。SFP Ⅰ在 17KD 以下分子量區(qū)間 以下的分子量區(qū)間范圍均有分布，而 SFP確實制得了均分子量不同的三組絲素肽。分子量的測定C）是測定分子量和其分布最常用的快速有。其色譜柱內(nèi)填充的是多孔性填料（凝膠孔和通道。當分析的樣品通過溶劑進入色，較大的分子只進入較大孔中，而較小的分，不同大小的分子就得到了分離，較大的分

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Caspase家族與細胞凋亡的研究進展[J]. 楊濤,費振海,鐘興明.  浙江醫(yī)學(xué). 2018(18)
[2]組織工程支架材料:特征及在組織工程中的應(yīng)用[J]. 葛振,鄒剛,劉毅,張駿,李豫皖,董立明.  中國組織工程研究. 2018(26)
[3]MTT法檢測夏枯消瘤丸含藥血清對人肺癌A549細胞的實驗研究[J]. 王素娟,王愷,侯燕琳.  山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2018(01)
[4]骨髓間充質(zhì)干細胞移植對丙烯酰胺中毒大鼠脊髓組織細胞凋亡的影響[J]. 孫經(jīng)淞,周雪穎,曲淑賢,步同靜,李雙月.  中國組織工程研究. 2018(05)
[5]多肽類藥物抗腫瘤藥理研究進展[J]. 王美颯,閻昭.  天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017(04)
[6]抗病毒多肽藥物的研究進展[J]. 徐君,周長林,竇潔.  藥物生物技術(shù). 2017(03)
[7]再生絲素蛋白纖維及其在生物醫(yī)用材料中的研究進展[J]. 吳惠英.  絲綢. 2017(03)
[8]凝膠滲透色譜法測定含氟聚合物的相對分子質(zhì)量及其分布[J]. 李俊玲,李慧,宋亦蘭,徐曉玲,王雯霞,庹洪,李斌,陳立義.  有機氟工業(yè). 2017(01)
[9]抗腫瘤多肽藥物的作用機制及研究進展[J]. 王淑靜,劉歡,趙建凱,任爽,孫薇薇,張文君,張家寧,張寒.  藥學(xué)研究. 2016(12)
[10]絲素肽對過氧化氫致A549細胞損傷的修復(fù)作用[J]. 朱震,王小娟,鄧晗依,李春春,銀華,安艷.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué). 2016(03)

碩士論文
[1]周村水庫藻類特征及其在混合脅迫條件下的生長衰亡規(guī)律[D]. 趙洪.揚州大學(xué) 2014
[2]蠶絲蛋白肽抗腫瘤與抗氧化作用研究[D]. 黃慧明.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]絲素肽的酶法制備及其生物活性的研究[D]. 羅美琪.華南理工大學(xué) 2012
[4]基于制備環(huán)境的家蠶絲膠蛋白分子形態(tài)構(gòu)象與生物學(xué)性能研究[D]. 張瑤琴.重慶理工大學(xué) 2011



本文編號：3545589