目的通過(guò)實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞分析法（real time cell analysis, RTCA）與MTT法的比較研究,探討RTCA法用于醫(yī)療器械細(xì)胞毒性常規(guī)檢測(cè)的可行性。方法首先,通過(guò)篩選細(xì)胞接種密度建立基于L929細(xì)胞的RTCA細(xì)胞毒性檢測(cè)方法。然后,使用不同濃度的DMSO稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照材料浸提液、56批真實(shí)世界的醫(yī)療器械產(chǎn)品,從簡(jiǎn)單到復(fù)雜分別比較RTCA法與MTT法用于細(xì)胞毒性檢測(cè)結(jié)果的一致性,并且匯總多次試驗(yàn)的陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果,比較兩種方法的可重復(fù)性。結(jié)果 RTCA法檢測(cè)不同濃度的DMSO稀釋液沒(méi)有劑量效應(yīng)關(guān)系,檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照材料浸提液與MTT法結(jié)果完全一致并高度相關(guān)（R=0.989 8）,檢測(cè)56批醫(yī)療器械產(chǎn)品與MTT法結(jié)果一致率為80.4%,僅中度相關(guān)（R=0.618 3）。RTCA法的可重復(fù)性不比MTT法好。結(jié)論 RTCA法能有效檢測(cè)醫(yī)療器械細(xì)胞毒性,但是部分產(chǎn)品可能因溶出物干擾檢測(cè)結(jié)果而不適用。RTCA法作為一種新型的醫(yī)療器械細(xì)胞毒性檢測(cè)方法的適用性還需要進(jìn)一步研究。 

【文章來(lái)源】：北京生物醫(yī)學(xué)工程. 2020,39(06)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

不同細(xì)胞接種密度的增殖曲線

一般MTT法中常用5%～20% DMSO稀釋液作為細(xì)胞毒性檢測(cè)的陽(yáng)性對(duì)照,用于模擬材料浸提液。本文首先選用不同濃度的DMSO溶液作為模擬材料溶出物來(lái)驗(yàn)證RTCA法的反應(yīng)性。RTCA法檢測(cè)細(xì)胞毒性的反應(yīng)曲線如圖2所示,RTCA法和MTT法檢測(cè)的細(xì)胞存活率結(jié)果如表1所示。從圖2可以看出,梯度稀釋的DMSO溶液的細(xì)胞毒性反應(yīng)沒(méi)有出現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系,2.5%DMSO的反應(yīng)曲線遠(yuǎn)高于陰性對(duì)照組,20%的曲線反而高于10%和5%的曲線。而表1的MTT法測(cè)得的結(jié)果呈現(xiàn)良好的劑量效應(yīng)曲線。相關(guān)性分析得到Pearson相關(guān)系數(shù)R=0.521 5,僅中度相關(guān)。

標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照材料成分明確且簡(jiǎn)單,適用于初步驗(yàn)證RTCA法的可行性。HDPE和ZDEC是ISO 10993-5:2009推薦的細(xì)胞毒性對(duì)照材料。因?yàn)閆DEC細(xì)胞毒性較大,直接使用浸提原液進(jìn)行驗(yàn)證不能準(zhǔn)確比較兩種方法測(cè)試結(jié)果的差異,因此將ZDEC浸提液稀釋成不同梯度(100%、50%、25%、12.5%)。RTCA法檢測(cè)的細(xì)胞毒性曲線如圖3所示,RTCA法和MTT法檢測(cè)的細(xì)胞存活率結(jié)果如表2所示�？梢钥闯鯮TCA法和MTT法對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)材料浸提液的細(xì)胞毒性結(jié)果一致。對(duì)于陰性對(duì)照材料HDPE都得到了陰性結(jié)果,對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照材料ZDEC,100%、50%、25%稀釋液都有明顯細(xì)胞毒性,而12.5%稀釋液沒(méi)有明顯毒性。相關(guān)性分析得到Pearson相關(guān)系數(shù)R=0.989 8,高度相關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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