目的:本研究觀察三維條件下富含滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞/軟骨細(xì)胞的脫去細(xì)胞含有細(xì)胞外基質(zhì)的支架復(fù)合物成軟骨能力。方法:（1）兔膝關(guān)節(jié)滑膜組織及軟骨組織、腹股溝部脂肪組織分離培養(yǎng),體外擴(kuò)增。（2）取生長(zhǎng)良好的第1代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用慢病毒介導(dǎo)TGF-β3轉(zhuǎn)染,后接種于3D打印的聚己內(nèi)酯/羥基磷灰石（PCL-HA）復(fù)合支架材料。（3）將滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞/軟骨細(xì)胞接種于構(gòu)建好的富細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的支架材料體外培養(yǎng)構(gòu)建關(guān)節(jié)軟骨。（4）采用RT-PCR檢測(cè)RNA水平上COL-I、COL-II、SOX-9、Aggrecan基因表達(dá)的影響。（5）采用免疫印跡法檢測(cè)軟骨特異性蛋白的表達(dá)。結(jié)果:（1）將接種轉(zhuǎn)染后的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的支架復(fù)合物培養(yǎng)14d后,激光共聚焦掃描可見(jiàn)細(xì)胞在支架表面分布均勻,逐層掃描后細(xì)胞逐漸減少。（2）將滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞/軟骨細(xì)胞混合培養(yǎng)于ECM-PCL-HA支架材料后,體外培養(yǎng)1周、2周及4周后,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR,滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞/軟骨細(xì)胞接種于ECM-PCL-HA組,單純滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞或單純軟骨細(xì)胞接種于ECM-PCL-HA組,從時(shí)間上（1周,2周及4周）可見(jiàn)Aggreca... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

兔來(lái)源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（a.原代ADSCsb.第三代細(xì)胞ADSCs）

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖2兔來(lái)源滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞（a.原代SMSCsb.第二代細(xì)胞SMSCs）Fig.2MorphologyofRabbitsynovialmesenchymalstemcells(a.P0b.P2)圖3兔來(lái)源軟骨細(xì)胞（a.原代軟骨細(xì)胞b.第二代軟骨細(xì)胞）Fig.3MorphologyofRabbitchondrocytes(a.P0b.P2)1.2PCL-HA支架材料對(duì)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞毒性檢測(cè)使用CCK-8法檢測(cè)PCL-HA支架材料浸泡提取液對(duì)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞毒性的檢測(cè)結(jié)果（如表5所示），繪制成折線圖后可見(jiàn)，P3代中滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞從第一天至第四天呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)狀態(tài)，第四天達(dá)到高峰期，第六天生長(zhǎng)逐漸進(jìn)入平臺(tái)期且細(xì)胞等增殖狀態(tài)逐漸減慢，整體的SMSCs細(xì)胞PCL-HA支架材料的毒性檢測(cè)可見(jiàn)呈“S”形（圖4）。計(jì)算統(tǒng)計(jì)值兩組之間結(jié)果表明P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩組細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯差異，說(shuō)明PCL-HA支架材料對(duì)SMSCs細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用，對(duì)細(xì)胞的增殖無(wú)影響。

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文18表5細(xì)胞毒性所測(cè)A值(x±s）Table5ProliferationcurvesofmeasuredvalueofA分組天數(shù)（d）1d2d3d4d5d6d7d8d9dA組0.619±0.0941.089±0.1011.852±0.1182.594±0.1672.462±0.1322.723±0.4032.801±0.2022.651±0.3271.235±0.084B組0.623±0.1141.035±0.0551.923±0.0542.585±0.2242.371±0.2252.708±0.1202.802±0.1772.705±.0.1691.184±0.141圖4PCL-HA支架對(duì)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞毒性的增殖曲線檢測(cè)（注：1×103個(gè)細(xì)胞）Fig.4DetectionofPCL-HAscaffoldsontheproliferationofsynovialmesenchymalstemcells圖注：A組為正常DMEM培養(yǎng)基，B組為PCL-HA支架材料浸泡后的DMEM。2ECM-PCL-HA支架材料的制備2.1將ADSCs用攜帶TGF-β3的慢病毒轉(zhuǎn)染正常脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞于熒光倒置顯微鏡或共聚焦顯微鏡下無(wú)熒光顯影效果，將其轉(zhuǎn)染攜帶TGF-β3的慢病毒72h后于熒光倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均可見(jiàn)綠色熒光顯影效果（圖5a）。提示攜帶TGF-β3的慢病毒已轉(zhuǎn)染至脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)，因其轉(zhuǎn)染至細(xì)胞核內(nèi)，提示將其傳代后也可穩(wěn)定表達(dá)（圖5b）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]三維環(huán)境下軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨樣細(xì)胞的分化[J]. 楊萌,邵博,龔忠誠(chéng),寧曉婷,劉慧,克熱木·阿巴斯,凌彬,尹小朋,王冰,胡露露,王玥,胡鑫,林兆全.  中國(guó)組織工程研究. 2016(11)
[2]Current research on pharmacologic and regenerative therapies for osteoarthritis[J]. Wei Zhang,Hongwei Ouyang,Crispin R Dass,Jiake Xu.  Bone Research. 2015(04)
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[4]TGF-β3真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)其向軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 鄭東,楊述華,袁曉梅,李進(jìn),馮勇,徐亮,梅榮成.  中國(guó)矯形外科雜志. 2007(06)



本文編號(hào)：3507110