發(fā)布時間：2017-05-08 07:09

  本文關(guān)鍵詞：納米羥基磷灰石的改良及其體外基因轉(zhuǎn)染研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過化學(xué)共沉淀-水熱合成法制備納米羥基磷灰石,研究其制備過程中的若干影響因素對納米羥基磷灰石形態(tài)結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性的影響,通過改良納米的制備條件,結(jié)合PEI進行表面修飾,提高體外細胞的轉(zhuǎn)染效率。 方法：通過透射電鏡觀察及粒徑、電位測定,選擇優(yōu)化參數(shù),通過聚乙烯亞胺進行表面修飾,測定修飾前后的納米羥基磷灰石在室溫的懸浮穩(wěn)定性、與DNA的結(jié)合和保護能力及體外細胞轉(zhuǎn)染能力。 結(jié)果：1)改良的實驗參數(shù)為：Ca/P比1.67：1、Ca(NO3)2·4H2O與(NH4)2HPO4的初始濃度為0.15mmol/L、慢速混合(15滴/分),pH值為10-10.5、170℃,反應(yīng)3小時、自然冷卻(室溫下放置24小時)。2)經(jīng)PEI修飾后的nHAP具有更好的懸浮穩(wěn)定性、DNA結(jié)合力及體外細胞轉(zhuǎn)染率。 結(jié)論：1)在納米羥基磷灰石制備過程中,Ca/P比、反應(yīng)物初始濃度、反應(yīng)物混合速率、反應(yīng)pH值、反應(yīng)的時間和溫度等都會導(dǎo)致納米的形態(tài)結(jié)構(gòu)及熱穩(wěn)定性發(fā)生改變。2)當(dāng)PEI濃度為4‰時,PEI-nHAP與質(zhì)粒DNA結(jié)合穩(wěn)定性最好。3)改良后的納米羥基磷灰石轉(zhuǎn)染Hela細胞的轉(zhuǎn)染率約為6%,通過PEI修飾的納米羥基磷灰石的轉(zhuǎn)染率約為21%。(圖25幅,表34個,參考文獻31篇)
【關(guān)鍵詞】：納米羥基磷灰石 聚乙烯亞胺 化學(xué)共沉淀-水熱合成法 基因載體 基因轉(zhuǎn)染率
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 目錄8-11
• 1 前言11-14
• 2 實驗部分14-26
• 2.1 實驗材料及設(shè)備14-16
• 2.1.1 主要試劑及材料14-15
• 2.1.2 主要實驗設(shè)備15
• 2.1.3 實驗所需培養(yǎng)基及試劑15-16
• 2.1.4 其他16
• 2.2 納米羥基磷灰石的制備及修飾實驗16-20
• 2.2.1 nHAP的制備及改良16-20
• 2.2.2 PEI修飾nHAP材料的制備20
• 2.3 nHAP、PEI-nHAP的體外細胞的轉(zhuǎn)染實驗20-26
• 2.3.1 nHAP、PEI-nHAP的懸浮穩(wěn)定性20-21
• 2.3.2 保存質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、抽提、測序、純化21-23
• 2.3.3 不同濃度的PEI修飾nHAP與質(zhì)粒DNA的結(jié)合試驗23
• 2.3.4 nHAP、PEI-nHAP與質(zhì)粒DNA的結(jié)合實驗23
• 2.3.5 nHAP、PEI-nHAP與質(zhì)粒DNA的保護實驗23
• 2.3.6 nHAP、PEI-nHAP介導(dǎo)pEGFP-N1-NT3基因在Hela細胞的體外轉(zhuǎn)染23-26
• 3 實驗結(jié)果26-45
• 3.1 nHAP的電鏡表征及Ca/P的檢測26-39
• 3.1.1 不同實驗參數(shù)的納米羥基磷灰石的透射電鏡的表征26-39
• 3.2 nHAP、PEI-nHAP的體外細胞的轉(zhuǎn)染實驗39-45
• 3.2.1 nHAP、PEI-nHAP的懸浮穩(wěn)定性39-41
• 3.2.2 保存質(zhì)粒的測序41-42
• 3.2.3 不同濃度的PEI修飾nHAP與質(zhì)粒DNA的結(jié)合試驗42
• 3.2.4 不同濃度的nHAP、PEI-nHAP與質(zhì)粒DNA的結(jié)合試驗42-43
• 3.2.5 不同濃度的nHAP、PEI-nHAP與質(zhì)粒DNA的保護實驗43
• 3.2.6 nHAP、PEI-nHAP介導(dǎo)pEGFP-N1-NT3基因轉(zhuǎn)染Hela細胞43-45
• 4 討論45-49
• 4.1 納米羥基磷灰石制備的實驗參數(shù)的改良45-47
• 4.2 nHAP、PEI-nHAP的懸浮穩(wěn)定性47-48
• 4.3 不同濃度的PEI修飾nHAP與質(zhì)粒DNA的結(jié)合48-49
• 5 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-53
• 附錄53-54
• 綜述54-61
• 參考文獻58-61
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果61-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊慶;王潔欣;郭奮;邵磊;陳建峰;;微反應(yīng)器結(jié)合水熱法制備羥基磷灰石納米粉體[J];北京化工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年06期

2 郭連峰;臺立剛;王成燾;;反應(yīng)溫度對合成納米羥基磷灰石粉體的粒度和相結(jié)構(gòu)的影響[J];電子顯微學(xué)報;2006年05期

3 宋江鳳;劉詠;張瑩;;水熱法合成不同形貌羥基磷灰石[J];粉末冶金材料科學(xué)與工程;2010年05期

4 朱晏軍,王瑋竹,閆玉華;納米羥基磷灰石(HAP)的制備方法及應(yīng)用[J];佛山陶瓷;2003年07期

5 盧曉英;王秀紅;劉治;翁杰;;反應(yīng)pH值對原位水熱沉積法制備納米羥基磷灰石/殼聚糖復(fù)合材料的影響[J];復(fù)合材料學(xué)報;2009年04期

6 郭榮,鄒萍,陸華中;非病毒型納米載體在基因治療中的研究現(xiàn)狀及展望[J];國外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊;2002年02期

7 李蔚,高濂;納米羥基磷灰石粉體的制備和低溫?zé)Y(jié)[J];過程工程學(xué)報;2002年04期

8 楊輝;王棟;蔡日強;;共沉淀法制備高純度納米羥基磷灰石的研究[J];精細化工;2010年01期

9 汪曉霞,張海黔;羥基磷灰石晶須的水熱法合成及表征[J];南京航空航天大學(xué)學(xué)報;2005年05期

10 廖其龍,徐光亮,周大利,尹光福,鄭昌瓊,李曉東;水熱合成納米羥基磷灰石粉末及其結(jié)構(gòu)表征[J];四川大學(xué)學(xué)報(工程科學(xué)版);2002年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳學(xué)文;基于羥基磷灰石的納米基因載體的改良及其內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染的實驗研究[D];中南大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：納米羥基磷灰石的改良及其體外基因轉(zhuǎn)染研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：350673