本文關(guān)鍵詞：兒童脂肪干細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)及其復(fù)合膠原羥基磷灰石支架的生物相容性的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分兒童脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及向成骨細(xì)胞誘導(dǎo) [摘要]目的：研究從兒童脂肪組織中分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞，進(jìn)行觀察和鑒定，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供種子細(xì)胞。方法：收集手術(shù)中棄用切除的脂肪組織，使用酶消化后，通過密度梯度離心獲得兒童脂肪干細(xì)胞，進(jìn)行體外分離和培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況， MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)活性，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物。選第三代脂肪干細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)后，進(jìn)行Von Kossa染色鈣化結(jié)節(jié)和堿性磷酸酶檢測(cè)。結(jié)果：成功的在體外分離培養(yǎng)出兒童脂肪源性干細(xì)胞，連續(xù)傳至20代。MTT法顯示細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛；表面標(biāo)志CD44，CDl05呈陽性高表達(dá)，CD34，CD45呈陰性低表達(dá)。將其誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞，進(jìn)行Von Kossa染色鈣化結(jié)節(jié)、堿性磷酸酶檢測(cè)的結(jié)果都為陽性。結(jié)論：經(jīng)體外分離培養(yǎng)、觀察和進(jìn)行有關(guān)鑒定，證實(shí)所培養(yǎng)出來的是脂肪干細(xì)胞，成功將其誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞。 第二部分膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備和表征 [目的：制備I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料并對(duì)其進(jìn)行表征。方法：將羥基磷灰石分散液和牛腱I型膠原溶脹液依照特定的比例配制支架材料模擬天然骨，利用光學(xué)儀器對(duì)其進(jìn)行觀察和表征。結(jié)果：利用掃描電子顯微鏡，透射電子顯微鏡，紅外光譜，X射線衍射對(duì)材料進(jìn)行考察。證明了該支架具有良好的承載能力和力學(xué)性能。結(jié)論：我們制備的I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料具有與天然骨相似的特征，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的種子細(xì)胞提供了載體基礎(chǔ)。 第三部分成骨誘導(dǎo)兒童脂肪干細(xì)胞復(fù)合膠原/羥基磷灰石支架的生物相容性的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià) 目的：將制備的I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料結(jié)合兒童脂肪干細(xì)胞進(jìn)行體外體內(nèi)的相容性實(shí)驗(yàn)。方法：I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架與第三代成骨誘導(dǎo)的兒童脂肪干細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)，在倒置顯微鏡下觀察支架材料對(duì)細(xì)胞的影響；進(jìn)行支架材料的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)。皮內(nèi)注射支架材料浸提液觀察注射后的變化；另外，在SD大鼠體內(nèi)包埋二組支架材料：實(shí)驗(yàn)組，支架材料結(jié)合細(xì)胞；對(duì)照組，支架材料。2、4、6、8、10周處死動(dòng)物后，進(jìn)行大體形態(tài)、影像學(xué)和組織學(xué)檢查。結(jié)果：體外復(fù)合培養(yǎng)顯示,在三個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)良好、生長(zhǎng)旺盛；支架材料無毒性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，1.皮內(nèi)注射實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組無明顯差異。2.大體形態(tài)觀察，在術(shù)后2周二組大體形態(tài)差異不明顯。術(shù)后6、10周實(shí)驗(yàn)組的支架材料形態(tài)結(jié)構(gòu)大體存在；對(duì)照組的大體形態(tài)不復(fù)存在，僅見支架材料的少量殘余。3.影像學(xué)檢查：X線透視顯示,實(shí)驗(yàn)組的植入物密度逐漸增高，對(duì)照組的植入物密度降低、形態(tài)模糊。4.組織學(xué)檢查（HE染色），二組前4周的情況相似，都為炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)和組織包裹，毛細(xì)血管長(zhǎng)入。8周時(shí)二組炎癥反應(yīng)基本消失，實(shí)驗(yàn)組中出現(xiàn)類成骨細(xì)胞，對(duì)照組主要是肉芽包裹和少量脂肪細(xì)胞。10周實(shí)驗(yàn)組中出現(xiàn)類新生骨形成。對(duì)照組表現(xiàn)為材料降解吸收。結(jié)論：I型膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料結(jié)合成骨誘導(dǎo)的兒童脂肪干細(xì)胞在體內(nèi)外具有良好的生物相容性，而且具有成骨潛能。
【關(guān)鍵詞】：骨組織工程 生物相容性 兒童脂肪干細(xì)胞 成骨誘導(dǎo) I型膠原/羥基磷灰石
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R726.8;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 兒童脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)11-22
• 前言11
• 一、材料11
• 二、主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器11-12
• 三、實(shí)驗(yàn)方法12-15
• 四、結(jié)果15-16
• 五、討論16-18
• 六、結(jié)論18-19
• 參考文獻(xiàn)19-22
• 第二部分 膠原/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備和表征22-32
• 前言22
• 一、實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 二、實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 三、結(jié)果24-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 第三部分 兒童脂肪干細(xì)胞復(fù)合膠原/羥基磷灰石支架的體內(nèi)外生物相容性的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)32-42
• 前言32
• 一、實(shí)驗(yàn)材料和儀器32-33
• 二、實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 三、結(jié)果35-37
• 四、討論37-39
• 五、結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 附圖42-52
• 綜述 脂肪干細(xì)胞在骨組織工程中的研究進(jìn)展52-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 附錄61-62
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表文章62-63
• 致謝63-65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：350322