本文關鍵詞：PHBV納米纖維對大鼠骨髓間充質干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探究靜電紡絲制備的聚羥基丁酸戊酸共聚酯(Poly-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate , PHBV)納米材料對大鼠骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)粘附、增殖以及向神經(jīng)元樣細胞分化的影響,為PHBV納米材料與骨髓間充質干細胞聯(lián)合移植治療脊髓損傷提供新的依據(jù)。方法：取4周齡(100-120g)的SD大鼠,將股骨和脛骨分離出,從中提取骨髓,采用貼壁分離培養(yǎng)的方法分離純化大鼠BMSCs,待細胞融合80%后1：2分瓶傳代,傳至第3代時,細胞計數(shù)后,以2×104/ml接種至靜電紡絲制備的PHBV納米纖維膜(定向A-NF與非定向R-NF)上,以接種至玻片上為對照組,倒置顯微鏡下觀察對照組細胞形態(tài)。用電鏡觀察細胞與PHBV納米纖維膜的粘附情況,于培養(yǎng)第1、4、7天時,使用細胞計數(shù)試劑盒CCK-8檢測各組細胞增殖情況。待細胞與PHBV納米纖維膜融合后,以維甲酸(RA)作為增殖及分化誘導因子,每孔加入200uL對BMSCs進行增殖培養(yǎng)、分化誘導,倒置顯微鏡下觀察對照組細胞生長形態(tài)的變化,于第2、4、6天將各組細胞采用4%多聚甲醛固定,封閉,用Nestin,MAP-2, GFAP抗體行化學染色鑒定神經(jīng)干細胞,神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞的生成情況。結果：BMSCs與PHBV納米纖維膜有很好的相容性,定向與非定向PHBV納米纖維膜均能很好的促進細胞增殖,第1天,A-NF與R-NF表面細胞略多于玻片上的細胞,A-NF與玻片上細胞無統(tǒng)計學意義(P0.05), R-NF表面細胞與兩者皆有統(tǒng)計學意義(P0.05),第4天及第7天時,A-NF與R-NF表面細胞顯著增長,其中R-NF表面細胞增殖顯著高于A-NF表面,具有統(tǒng)計學意義(P0.05),且兩者與玻片細胞均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在A-NF表面的細胞沿纖維方向生長,其形態(tài)被顯著拉長。加入維甲酸(RA)誘導劑24h后,細胞形態(tài)開始變化,胞體開始回縮,突起逐漸伸出。免疫熒光染色示PHBV纖維膜上的細胞在第2天即可檢測到Nestin陽性細胞的表達,第4天可檢測到MAP-2, GFAP陽性細胞表達,對照玻片組第4天開始表達Nestin抗體,第6天開始表達MAP-2, GFAP抗體。結論：A-NF和R-NF均能很好的促進細胞增殖,有良好的相容性,且R-NF表面細胞增殖顯著高于A-NF表面。定向納米纖維通過引導細胞骨架延伸從而對細胞形貌產(chǎn)生顯著影響,使著細胞沿著纖維方向定向生長,這和神經(jīng)細胞軸突定向生長相符合。PHBV納米纖維膜能促進BMSCs向神經(jīng)元樣細胞的分化,縮短分化所需的時間。因此,我們認為定向納米纖維支架可能在神經(jīng)組織工程中更有優(yōu)勢。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 PHBV納米材料 神經(jīng)元樣細胞 定向 非定向 靜電紡絲
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R68;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-13
• 綜述13-21
• 材料與方法21-30
• 一. 實驗器材及試劑21-24
• 二. 實驗的方法步驟24-29
• 三. 統(tǒng)計學方法29-30
• 實驗結果30-38
• 1. 材料的形態(tài)學觀察30-31
• 2. BMSCS的培養(yǎng)31-32
• 3. BMSCS在PHBV材料上的表面形態(tài)32-33
• 4. 倒置顯微鏡下觀察對照組神經(jīng)元細胞的形態(tài)變化33
• 5. 細胞活性的檢測33-34
• 6. BMSCS的誘導分化及鑒定34-38
• 討論38-42
• 1. PHBV納米纖維膜38-39
• 2. 大鼠間充質干細胞的原代獲取與鑒定39
• 3. PHBV與細胞的融合39-42
• 結論42-43
• 論文總結43-46
• 1 論文創(chuàng)新43-44
• 2 論文不足44-45
• 3 展望45-46
• 參考文獻46-50
• 致謝50-52
• 作者簡介52
• 研究生發(fā)表論文52

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本文編號：345965