促進(jìn)心血管植入材料原位內(nèi)皮化是解決傳統(tǒng)植入物植入術(shù)后帶來(lái)的血栓、炎癥和再狹窄等不良反應(yīng)的有效手段。如何能夠更有效地實(shí)現(xiàn)快速原位內(nèi)皮化,并保證內(nèi)皮化的長(zhǎng)期有效性是心血管植入材料研究面臨的重要挑戰(zhàn)。本研究以此為背景,結(jié)合層狀組裝方法學(xué),采用不同策略,針對(duì)實(shí)現(xiàn)材料的原位內(nèi)皮化中兩個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題：1.如何提升內(nèi)皮細(xì)胞（EC）相對(duì)于平滑肌細(xì)胞（SMC）的競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)現(xiàn)在復(fù)雜體內(nèi)環(huán)境中的快速原位內(nèi)皮化；2.如何維持所形成內(nèi)皮層的內(nèi)皮功能,開展了如下研究：1.基于基因技術(shù)“轉(zhuǎn)染過(guò)程的非細(xì)胞特異性和轉(zhuǎn)染產(chǎn)物的細(xì)胞特異性”的特點(diǎn),將編碼肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）的質(zhì)粒DNA（HGF-pDNA）,與聚陽(yáng)離子硫酸魚精蛋白（PrS）進(jìn)行層狀組裝構(gòu)建功能基因多層膜（PrS/HGF-pDNA）,該多層膜能夠同時(shí)轉(zhuǎn)染EC和SMC并使其分泌能夠特異性促進(jìn)EC生長(zhǎng)的HGF,使得（PrS/HGF-pDNA）多層膜能夠特異性地促進(jìn)EC增殖而對(duì)SMC的增殖沒有影響,并且在共培養(yǎng)體系中提升了EC相對(duì)于SMC的競(jìng)爭(zhēng)性。進(jìn)一步將（PrS/HGF-pDNA）多層膜修飾冠脈支架,在動(dòng)物體內(nèi)能夠?qū)崿F(xiàn)快速內(nèi)皮化,并有效降低術(shù)后支架內(nèi)再狹窄率。該研究... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 心血管疾病的介入治療與再狹窄概述
        1.1.1 心血管疾病與介入治療
        1.1.2 再狹窄發(fā)生的病理
        1.1.3 藥物洗脫支架及其面臨的問(wèn)題
    1.2 植入材料表面原位內(nèi)皮化
        1.2.1 血管的組織結(jié)構(gòu)與內(nèi)皮細(xì)胞的重要性
        1.2.2 構(gòu)建促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的表面的研究
        1.2.3 提升內(nèi)皮細(xì)胞相對(duì)于平滑肌細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)性
        1.2.4 維持內(nèi)皮層的內(nèi)皮功能
    1.3 細(xì)胞外基質(zhì)的物理因素—硬度
        1.3.1 硬度對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        1.3.2 硬度對(duì)于內(nèi)皮功能的影響
    1.4 層狀組裝多層膜及其在生物醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用
        1.4.1 層狀組裝的概述
        1.4.2 層狀組裝多層膜負(fù)載生物活性分子的研究
        1.4.3 層狀組裝多層膜硬度調(diào)控細(xì)胞行為的研究
    1.5 課題提出與設(shè)計(jì)思路
        1.5.1 課題提出
        1.5.2 具體設(shè)計(jì)思路
第二章 功能基因多層膜提升內(nèi)皮細(xì)胞相對(duì)于平滑肌細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)性
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 原料與試劑
        2.2.2 (PrS/DNA)多層膜的構(gòu)建
        2.2.3 (PrS/DNA)多層膜的表征
        2.2.4 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 EC和SMC的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 EC和SMC的增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 EC和SMC的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 功能基因多層膜心血管支架的構(gòu)建
        2.2.9 功能基因多層膜修飾后支架的動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 多層膜的構(gòu)建與表征
            2.3.1.1 QCM-D跟蹤多層膜的組裝
            2.3.1.2 (PrS/HGF-pDNA)_n多層膜的厚度
            2.3.1.3 (PrS/HGF-pDNA)_n多層膜的穩(wěn)定性
            2.3.1.4 (PrS/HGF-pDNA)_n多層膜的表面形貌
        2.3.2 (PrS/HGF-pDNA)_(12)多層膜對(duì)EC和SMC的轉(zhuǎn)染
        2.3.3 EC和SMC的增殖
        2.3.4 (PrS/HGF-pDNA)_(12)多層膜對(duì)EC和SMC競(jìng)爭(zhēng)性的影響
        2.3.5 (PrS/HGF-pDNA)_(12)多層膜修飾心血管支架及其體內(nèi)的評(píng)價(jià)
            2.3.5.1 (PrS/HGF-pDNA)_(12)多層膜修飾后支架的表面形貌
            2.3.5.2 (PrS/HGF-pDNA)_(12)多層膜支架表面內(nèi)皮化的評(píng)價(jià)
            2.3.5.3 (PrS/HGF-pDNA)_(12)多層膜支架抗再狹窄效果的評(píng)價(jià)
    2.4 本章小結(jié)
第三章 軟硬材料復(fù)合策略實(shí)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞的選擇性粘附
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 原料與試劑
        3.2.2 下層基底的準(zhǔn)備
        3.2.3 (PrS/DNA)_n多層膜的制備
        3.2.4 (PrS/DNA)_n多層膜的表征
        3.2.5 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.6 EC和SMC的粘附實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 EC和SMC的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 (PrS/DNA)_n多層膜的構(gòu)建與表征
        3.3.2 EC和SMC的粘附
        3.3.3 EC/SMC的選擇性粘附
        3.3.4 (PAH/PSS)_n多層膜表面的EC選擇性粘附
        3.3.5 PET與SS代替玻璃基底實(shí)現(xiàn)EC的選擇性粘附
        3.3.6 調(diào)控細(xì)胞粘附的因素
        3.3.7 不同硬度下層基底構(gòu)建(PrS/DNA)_n多層膜實(shí)現(xiàn)EC的選擇性粘附
    3.4 本章小結(jié)
第四章 生長(zhǎng)因子協(xié)同基底硬度對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和內(nèi)皮功能的影響
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 原料與試劑
        4.2.2 多層膜的組裝和交聯(lián)
        4.2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.4 EC的粘附實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 EC的遷移實(shí)驗(yàn)
        4.2.6 EC的增殖實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 免疫蛋白印跡分析
        4.2.8 內(nèi)皮層的表征
            4.2.8.1 內(nèi)皮層形貌的表征
            4.2.8.2 內(nèi)皮層致密性的表征
            4.2.8.3 eNOS基因表達(dá)的檢測(cè)
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 EC的粘附
        4.3.2 EC的遷移
        4.3.3 EC的增殖
        4.3.4 EC的HGF受體表達(dá)
        4.3.5 內(nèi)皮層的評(píng)價(jià)
            4.3.5.1 內(nèi)皮層的形貌
            4.3.5.2 內(nèi)皮層的致密性
            4.2.5.3 eNOS的基因表達(dá)
    4.4 本章小結(jié)
第五章 柔性多層膜負(fù)載VEGF提升內(nèi)皮細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)性與內(nèi)皮功能
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 原料與試劑
        5.2.2 多層膜的組裝與交聯(lián)
        5.2.3 VEGF的負(fù)載
        5.2.4 細(xì)胞的培養(yǎng)
        5.2.5 EC與SMC的粘附實(shí)驗(yàn)
        5.2.6 EC/SMC的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
        5.2.7 EC與SMC的增殖實(shí)驗(yàn)
        5.2.8 內(nèi)皮層的表征
            5.2.8.1 內(nèi)皮層的形貌及致密性的表征
            5.2.8.2 一氧化氮(NO)的檢測(cè)
            5.2.8.3 內(nèi)皮功能相關(guān)的基因檢測(cè)
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 VEGF的負(fù)載
        5.3.2 EC的粘附
        5.3.3 SMC的粘附
        5.3.4 EC與SMC的VEGF受體對(duì)粘附的影響
        5.3.5 EC/SMC的選擇性粘附
        5.3.6 EC與SMC的增殖
        5.3.7 內(nèi)皮層的形貌及其致密性
        5.3.8 內(nèi)皮層NO的分泌
        5.3.9 內(nèi)皮功能相關(guān)基因的表達(dá)
    5.4 本章小結(jié)
第六章 全文主要結(jié)論、創(chuàng)新和展望
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的提取和培養(yǎng)
附錄Ⅱ 人類臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的提取和培養(yǎng)
附錄Ⅲ 細(xì)胞免疫熒光染色
附錄Ⅳ 免疫蛋白印跡(Western Blotting)
附錄Ⅴ qRT-PCR實(shí)驗(yàn)步驟
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Endothelial Cell Senescence and Age-Related Vascular Diseases[J]. Xiao-Li Tian,Yang Li.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(09)



本文編號(hào)：3430663