目的:通過(guò)乳液交聯(lián)法合成殼聚糖微球并負(fù)載骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein-2,BMP-2）,再將其復(fù)合于脫細(xì)胞基質(zhì)的小牛松質(zhì)骨支架,制備殼聚糖微球/小牛松質(zhì)骨支架復(fù)合緩釋體系。方法:使用紅外光譜儀、掃描電鏡對(duì)合成的復(fù)合緩釋系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征和形貌觀察,并對(duì)微球的包封率和載藥量進(jìn)行檢測(cè)。用動(dòng)態(tài)浸泡的方法來(lái)檢測(cè)BMP-2的體外釋放特征,通過(guò)體外檢測(cè)復(fù)合體系的細(xì)胞毒性和對(duì)細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:殼聚糖發(fā)生了交聯(lián)并成功包載了BMP-2,微球平均直徑為5.982μm,表面光滑,且成功負(fù)載于小牛松質(zhì)骨支架,形成了新型的微球/支架藥物緩釋體系。緩釋數(shù)據(jù)表明,5 mg微球在體外釋放21 d,BMP-2逐漸釋放,第21天時(shí)濃度仍達(dá)到（239.1±20.0）mg/L。體外測(cè)試表明,該緩釋體系有利于小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3-E1的生長(zhǎng),促進(jìn)向成骨方向分化。結(jié)論:殼聚糖微球/小牛松質(zhì)骨支架復(fù)合緩釋體系實(shí)現(xiàn)了BMP-2的生物學(xué)功能及其在骨修復(fù)部位的持續(xù)、緩慢釋放,為骨組織缺損的修復(fù)治療及骨組織工程支架材料的選擇提供了依據(jù)。 

【文章來(lái)源】：北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016,48(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

乳化交聯(lián)法制備CS/BMP-2微球的裝置示意圖

ⅰ狢H2、—CH3的伸縮振動(dòng)峰以及C—O的特征峰。與其相比，b曲線(即CS微球)產(chǎn)生了新特征峰，1667．00/cm處代表C?O伸縮振動(dòng)峰出現(xiàn)，表明香草醛的羰基基團(tuán)連接到CS的氨基位點(diǎn)上，且1643．00/cm處出現(xiàn)的C?N振動(dòng)峰說(shuō)明CS與香草醛發(fā)生了交聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生了席夫堿(Schiffbase)。c曲線(BMP-2)的特征峰也相應(yīng)在d曲線(即CS/BMP-2)的FT-IＲ圖譜上，3435．34/cm處的—OH伸縮振動(dòng)峰移至3230．18/cm，說(shuō)明復(fù)合體中的分子內(nèi)和分子間的氫鍵作用加強(qiáng)。a，CSmaterial;b，CSmicrospheres;c，BMP-2;d，CS/BMP-2micro-spheres．圖2緩釋材料的紅外圖譜Figure2Fouriertransforminfraredofmaterials2．2材料形貌觀察CS/BMP-2微球的形狀及表面形態(tài)如圖3所示，圖3A和B分別表示在不同放大倍數(shù)下觀察的CS/BMP-2微球。利用乳化交聯(lián)法制備的微球呈現(xiàn)出很好的球形，整個(gè)球體表面光滑，應(yīng)用掃描電鏡測(cè)量所制備微球的平均直徑為5．982μm。從圖4A中可以看出，采用掃描電鏡觀察所制備的CBB多孔支架材料的內(nèi)部具有明顯的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑約為300pm至500μm，且具有一定的定向性。大孔之間通過(guò)小孔連接，具有較好的連通性。當(dāng)負(fù)載微球后，由于膠原包裹到微球并使其粘附在CBB多孔支架上，使得CBB的孔徑得以填充，從圖4B中可以看出復(fù)合緩釋體的孔隙率明顯減小，孔徑為50～70μm，說(shuō)明CBB支架成功負(fù)載了CS微球。2．3包載率和包封率測(cè)定CS/BMP-2微球的包載率和包封率如表2所示，隨著B(niǎo)MP-2含量的增加，CS/BMP-2的包載率增加，但是包封率卻在下降，這說(shuō)明BMP-2能被成功包載于微球中。2．4CS/BMP-2微球的體外緩釋實(shí)驗(yàn)合成的CS/BMP-2微球中，BMP-2的含量約為(1．80±0．17)mg/g。采用動(dòng)態(tài)浸泡的方法檢測(cè)第1、3、5、7、10、14和21天緩釋液中BMP-2的含量，B

匫伸縮振動(dòng)峰出現(xiàn)，表明香草醛的羰基基團(tuán)連接到CS的氨基位點(diǎn)上，且1643．00/cm處出現(xiàn)的C?N振動(dòng)峰說(shuō)明CS與香草醛發(fā)生了交聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生了席夫堿(Schiffbase)。c曲線(BMP-2)的特征峰也相應(yīng)在d曲線(即CS/BMP-2)的FT-IＲ圖譜上，3435．34/cm處的—OH伸縮振動(dòng)峰移至3230．18/cm，說(shuō)明復(fù)合體中的分子內(nèi)和分子間的氫鍵作用加強(qiáng)。a，CSmaterial;b，CSmicrospheres;c，BMP-2;d，CS/BMP-2micro-spheres．圖2緩釋材料的紅外圖譜Figure2Fouriertransforminfraredofmaterials2．2材料形貌觀察CS/BMP-2微球的形狀及表面形態(tài)如圖3所示，圖3A和B分別表示在不同放大倍數(shù)下觀察的CS/BMP-2微球。利用乳化交聯(lián)法制備的微球呈現(xiàn)出很好的球形，整個(gè)球體表面光滑，應(yīng)用掃描電鏡測(cè)量所制備微球的平均直徑為5．982μm。從圖4A中可以看出，采用掃描電鏡觀察所制備的CBB多孔支架材料的內(nèi)部具有明顯的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑約為300pm至500μm，且具有一定的定向性。大孔之間通過(guò)小孔連接，具有較好的連通性。當(dāng)負(fù)載微球后，由于膠原包裹到微球并使其粘附在CBB多孔支架上，使得CBB的孔徑得以填充，從圖4B中可以看出復(fù)合緩釋體的孔隙率明顯減小，孔徑為50～70μm，說(shuō)明CBB支架成功負(fù)載了CS微球。2．3包載率和包封率測(cè)定CS/BMP-2微球的包載率和包封率如表2所示，隨著B(niǎo)MP-2含量的增加，CS/BMP-2的包載率增加，但是包封率卻在下降，這說(shuō)明BMP-2能被成功包載于微球中。2．4CS/BMP-2微球的體外緩釋實(shí)驗(yàn)合成的CS/BMP-2微球中，BMP-2的含量約為(1．80±0．17)mg/g。采用動(dòng)態(tài)浸泡的方法檢測(cè)第1、3、5、7、10、14和21天緩釋液中BMP-2的含量，BMP-2的釋放速度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降，第1天測(cè)得的緩釋液中BMP-2的含量達(dá)15%，呈現(xiàn)突釋效應(yīng)，第21天測(cè)得的緩釋液中BM


本文編號(hào)：3429866