目的:珍珠層粉（NP）是一種有機(jī)-無機(jī)天然生物材料,具有骨誘導(dǎo)能力及良好的生物相容性。富血小板纖維蛋白（PRF）是富含多種有利于軟硬組織愈合的生長因子和血小板的一種自體移植物,被多用于頜面外科成骨研究。故本研究利用珍珠層粉復(fù)合PRF修復(fù)新西蘭兔顱骨缺損的效果,以期為頜骨缺損的修復(fù)提供一種新材料和新方法。方法:本研究共分為三部分實驗,第一部分:分別提取Wistar大鼠和新西蘭兔足量血液離心,離心后將通過掃描電子顯微鏡（SEM）觀察獲得的PRF凝塊的形貌特征。第二部分:分別將珍珠層粉水溶性有機(jī)基質(zhì)（WSM）、PRF提取物（PRFe）及WSM+10%PRFe與成骨前體細(xì)胞（MC3T3-E1）共培養(yǎng),通過CCK-8檢測細(xì)胞增殖、粘附情況以及堿性磷酸酶（ALP）活性表達(dá),進(jìn)而檢測細(xì)胞的成骨分化情況。第三部分:選擇12只新西蘭兔作為研究對象,制備4個直徑為8mm的顱骨缺損作為頜骨缺損模型,分別植入A組實驗組:珍珠層粉復(fù)合富血小板纖維蛋白（NP/PRF）;B組對照組1:單純植入PRF;C組對照組2:單純植入NP;D組空白組對照組:不植入任何材料。分別于4、8、12周處死動物,通過大體標(biāo)本觀察、Mic... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ml鼠血液離心后未見形成的PRF

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文珍珠層粉復(fù)合富血小板纖維蛋白修復(fù)兔顱骨缺損的實驗研究10圖25ml兔血液離心后形成PRF2.2.3PRF的表征方法掃描電子顯微鏡SEM（ScanningElectronMicroscope）該實驗采用SEM對PRF橫斷面形貌進(jìn)行觀察。為了在電鏡下可以觀察到截面的形貌，將獲取的PRF纖維蛋白凝塊置于六孔板，加入2.5%戊二醛固定，置于4℃冰箱過夜，棄去固定液，PBS清洗三次后以50%，60%，70%，80%，90%，100%乙醇梯度脫水，樣品在每級停留15min。二氧化碳臨界點干燥，用金離子濺射涂層法噴金樣品1s，樣品的表面微觀形貌可用掃描電子顯微鏡觀察。照片采用20kv放大倍數(shù)×1000和×6000拍攝。2.3結(jié)果與討論結(jié)果：PRF大體觀察：從離心管內(nèi)取出的新鮮PRF呈圓柱狀，有彈性且質(zhì)韌，表面光滑。PRF的SEM掃描結(jié)果顯示，在×1000倍數(shù)中觀察，可觀察到少量的紅細(xì)胞游離在纖維網(wǎng)格之外，白細(xì)胞呈球形，表面不規(guī)則，血小板在纖維網(wǎng)格中呈聚集狀態(tài)，數(shù)量最多（圖3a）�？捎^察到線性蛋白網(wǎng)格多孔的立體結(jié)構(gòu)形成的纖維蛋白中，較多的纖維蛋白呈現(xiàn)為三叉結(jié)構(gòu)。在×6000倍數(shù)中可觀察到成熟的纖維蛋白網(wǎng)狀網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)（圖3b）。

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文珍珠層粉復(fù)合富血小板纖維蛋白修復(fù)兔顱骨缺損的實驗研究11圖3PRF的SEM圖像（a）×1000倍（b）×6000倍討論：近年來，PRF作為一種能夠促進(jìn)頜面部軟硬組織再生材料，有著巨大的發(fā)展勢頭。PRF的制備過程與制備PRP的過程非常相似，使用效果相對較好的PRF仍然是自體血離心。臨床中應(yīng)用于人體的PRF來源于至少10~15ml的血容量，而在目前的所涉動物研究中，主要分為小鼠及新西蘭兔，但小鼠因為自身血容量較少，在PRF的實驗中分為兩類，一類則是抽取大量小鼠或新西蘭兔的血液，而另一類則是在倫理審核通過后，應(yīng)用志愿者的供血以提取PRF。DingY等人[61]，通過抽取志愿者血液，即刻離心后將獲得的PRF載入到糖尿病小鼠模型中，得出結(jié)論為對于糖尿病小鼠皮膚創(chuàng)口，PRF可能會通過增加血管的形成來促進(jìn)其愈合。越來越多的研究采取這種辦法來研究PRF的體內(nèi)實驗[62]。然而，使用抽取小鼠血液方法的應(yīng)用越來越少，因為其存在提取量少以及無法離心出PRF等弊端。在動物模型的建立中，新西蘭兔則發(fā)揮出了較大的優(yōu)勢，首先因新西蘭兔自身血量較多，且離心及抽取方便，越來越多的研究采取新西蘭兔作為模型。例如在最近的研究中，以兔作為模型，證明了L-PRF與MSCs膜片聯(lián)合應(yīng)用可增強成骨作用,還有學(xué)者利用自體牙移植結(jié)合PRF來治療兔的顱骨缺損以促進(jìn)形成新骨[63]，更有將納米銀與PRF結(jié)合用于兔骨缺損修復(fù)，其兩種材料的聯(lián)合應(yīng)用效果大于單一材料的使用[64]。因此從大鼠和兔血液離心得到的PRF來看，決定本研究的實驗動物為新西蘭兔，作為后續(xù)實驗的實驗對象。通過PRF的SEM表明，PRF自身具備著大量的三維網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)，單獨使用在骨缺損修復(fù)中，不僅有利于血運重建，而且利于細(xì)胞穿透及組織的附著。有學(xué)者研究[65]，PRF能夠成功制備，需在60-90

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3406352