發(fā)布時(shí)間：2017-04-30 18:04

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合絲素蛋白多孔支架構(gòu)建組織工程脂肪的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1.探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,h UCMSCs)的體外分離、培養(yǎng)的方法,觀察其生物學(xué)特性;2.探討絲素蛋白多孔支架與h UCMSCs共培養(yǎng)構(gòu)建組織工程脂肪的可行性。方法:1.從新鮮的人臍帶中獲取華通氏膠,組織塊法提取人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),MMT法檢測(cè)并繪制細(xì)胞生長曲線,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面特征性標(biāo)記,成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)21天,油紅O染色觀察成脂情況;2.h UCMSCs細(xì)胞接種于絲素蛋白多孔支架,觀察細(xì)胞黏附率,MTT法測(cè)定及熒光染色觀察細(xì)胞在支架上的生長情況,成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞在支架上的成脂分化能力,將經(jīng)成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后的細(xì)胞支架復(fù)合物接種于S-D大鼠體內(nèi),觀察細(xì)胞支架復(fù)合物在體內(nèi)的成脂能力。結(jié)果:1.體外培養(yǎng)2周,組織塊周圍有梭形細(xì)胞游出;傳代培養(yǎng)至第10代,細(xì)胞形態(tài)與增殖能力無明顯變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD44、CD105陽性,CD14、CD34陰性。成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后表明h UCMSCs具有成脂能力,油紅O染色見細(xì)胞質(zhì)中有紅染的脂滴聚集。2.細(xì)胞在絲素蛋白多孔支架上有良好的黏附率,12h后平均黏附率超過80%。MTT法檢測(cè)顯示接種于絲素蛋白多孔支架上的細(xì)胞與貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞生長曲線無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。熒光倒置相差顯微鏡下觀察到,細(xì)胞與絲素蛋白支架共培養(yǎng)1~2天后細(xì)胞與支架充分附著,培養(yǎng)7~10天后生長活躍。共培養(yǎng)1周后序貫成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)2周,RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞Oct-4表達(dá)減弱,表達(dá)a P2和LPL。將共培養(yǎng)1周序貫成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)2周的細(xì)胞支架復(fù)合物植入S-D大鼠皮下,4周后取出,見有脂肪組織形成;8周后支架降解明顯,有新生脂肪組織形成;12周后支架降解完全,脂肪組織形成明顯;對(duì)照組無明顯脂肪組織生成。結(jié)論:1.h UCMSCs能在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及表現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞的生物特性;2.h UCMSCs具有向脂肪細(xì)胞方向分化的特性,可作為脂肪組織工程的種子細(xì)胞;3.絲素蛋白多孔支架與細(xì)胞共培養(yǎng)后并未影響細(xì)胞的生長及向脂肪方向分化,是一種理想的可降解生物支架,h UCMSCs與絲素蛋白支架共培養(yǎng)后可構(gòu)建組織工程脂肪。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 絲素蛋白多孔支架 組織工程脂肪
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstrast6-9
• 前言9-11
• 第一部分 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定11-24
• 一．實(shí)驗(yàn)材料與主要儀器11-13
• 二．實(shí)驗(yàn)方法13-15
• 三．結(jié)果15-18
• 四．討論18-20
• 五．結(jié)論20-21
• 參考文獻(xiàn)21-24
• 第二部分 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞結(jié)合絲素蛋白多孔支架構(gòu)建組織工程脂肪的研究24-39
• 一．實(shí)驗(yàn)材料與主要儀器24-26
• 二．實(shí)驗(yàn)方法26-30
• 三．結(jié)果30-34
• 四．討論34-37
• 五．結(jié)論37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 綜述39-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 中英文縮略詞表50-51
• 致謝51-52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 顏曉慧,鄭磊,洪華容,王前,張曉,俞耀庭;骨組織工程應(yīng)用可降解聚合物的可能性探討[J];國外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊(cè);2000年01期

2 曹誼林;;組織工程學(xué)的建立與發(fā)展[J];組織工程與重建外科雜志;2005年01期

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合絲素蛋白多孔支架構(gòu)建組織工程脂肪的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：337323