外泌體是一類可由絕大多數(shù)細(xì)胞分泌的微囊泡,攜帶有大量的核酸、蛋白質(zhì)等信息。此外,外泌體與多種生理和病理功能相關(guān),因此在疾病診斷和治療過程中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。開發(fā)新型的外泌體分離材料對(duì)于研究外泌體及其生物醫(yī)學(xué)功能具有重要的意義。本論文通過自由基聚合法合成了具有溶解-沉淀特性的pH響應(yīng)聚合物材料,并研究了其對(duì)外泌體的分離富集性能。全文共分為四章:第一章:分為四小節(jié),第一節(jié)是外泌體概述;第二節(jié)簡(jiǎn)述了外泌體分離方法研究近況;第三節(jié)簡(jiǎn)述了pH響應(yīng)聚合物的研究進(jìn)展;最后一節(jié)簡(jiǎn)述了本論文的主要研究?jī)?nèi)容。第二章:通過對(duì)氨基偶氮苯和丙烯酰氯反應(yīng)合成了丙烯酰胺偶氮苯（AAAB）單體,以AAAB和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯（DMAEMA）為單體,在偶氮二異丁腈（AIBN）引發(fā)下,合成了pH響應(yīng)聚合物材料。利用傅里葉變換紅外光譜儀、質(zhì)譜儀、核磁共振波譜儀等技術(shù)證明了pH響應(yīng)聚合物已成功制備。紫外濁度測(cè)試表明pH響應(yīng)聚合物具有靈敏的pH響應(yīng)特性,溶解-沉淀響應(yīng)的ΔpH在1個(gè)pH單位左右,當(dāng)pH由6.5增加到7.5時(shí)沉淀析出率在95%以上,且循環(huán)穩(wěn)定性良好。采用牛血清白蛋白（BSA）溶液考察了pH響應(yīng)聚合物的非特異... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

外泌體分泌及其結(jié)構(gòu)示意圖[6]

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文4圖1-2基于差速離心的外泌體純化流程圖Fig1-2FlowchartofexosomepurificationbasedondifferentialcentrifugationKim等人[56]比較了不同UC循環(huán)次數(shù)對(duì)外泌體富集純度的影響。一維凝膠圖像顯示，要成功地從分離的外泌體中去除非外泌體蛋白質(zhì)，至少需要進(jìn)行5個(gè)UC周期，但是外泌體的產(chǎn)量很低，從0.001-0.01%不等。蔗糖密度梯度離心法是另一種利用密度不同分離外泌體的方法[54,57]，外泌體的漂浮密度在1.15-1.19g/mL之間。Gupta等人[58]比較了一步法蔗糖緩沖UC（SUC）與差速UC用于外泌體分離時(shí)的差異。在他們的研究中，均以脂肪組織間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為模型，并分別用UC和SUC法純化外泌體。通過SUC法獲得的外泌體的濃度增加了約2-3倍。此外，新的等滲梯度（如碘克沙醇梯度）已被用來維持外泌體囊

第二章pH響應(yīng)聚合物的制備、表征及響應(yīng)性分析11泌體的破壞。此外，要求pH響應(yīng)聚合物應(yīng)具有較高的沉淀析出率，以提高外泌體的捕獲率。基于以上原則，本文選擇了AAAB和DMAEMA作為單體，采用傳統(tǒng)的自由基聚合方法合成了pH響應(yīng)聚合物。pH響應(yīng)聚合物的制備過程分為兩步，第一步首先合成AAAB，如圖2-1所示，準(zhǔn)確稱取對(duì)氨基偶氮苯2g，置于100mL圓底燒瓶中，加入55mL重蒸后的無水二氯甲烷，振蕩、攪拌使其完全溶解后加入三乙胺2.1mL。充分?jǐn)嚢?0min后，在冰浴下逐滴加入丙烯酰氯1.2mL，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后，用5%的碳酸氫鈉溶液洗滌反應(yīng)產(chǎn)物3次，分液漏斗收集有機(jī)層，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑二氯甲烷得到黃色固體粉末。然后用水和乙醚洗滌產(chǎn)物，過濾，最后將產(chǎn)物放到真空干燥箱中干燥后低溫避光保存?zhèn)溆�，所得AAAB產(chǎn)率為78.26%。圖2-1AAAB的合成Fig.2-1SynthesisofAAAB第二步以AAAB和DMAEMA為單體，通過自由基聚合反應(yīng)合成pH響應(yīng)聚合物（圖2-2）。為了控制pH響應(yīng)聚合物的沉淀臨界pH值，嘗試了三種AAAB/DMAEMA投料摩爾比3:1、1:1、1:3，引發(fā)劑AIBN的量均為反應(yīng)單體總物質(zhì)的量的1%，粗測(cè)產(chǎn)物溶解-沉淀臨界pH值，結(jié)果歸納如表2-3所示。由表2-3可知，當(dāng)單體投料比為AAAB:DMAEMA=1:1時(shí)，pH響應(yīng)聚合物的沉淀臨界pH可滿足后續(xù)分析的要求，因此本實(shí)驗(yàn)后續(xù)試驗(yàn)合成的pH響應(yīng)聚合物均采用此比例。圖2-2pH響應(yīng)聚合物的合成路線圖Fig.2-2ThesyntheticrouteofpHresponsivepolymer


本文編號(hào)：3346237