目的:探究生物可降解材料聚己內酯/β-磷酸三鈣（PCL/β-TCP）通過調控巨噬細胞極化對骨組織內血管生成的作用,為其臨床應用提供依據。方法:采用3D打印技術制備試樣并加以表征。體內實驗采用模型為SD大鼠股骨遠端植入模型。雙側植入PCL/β-TCP支架后采取免疫熒光染色觀察支架內部成血管標記物CD31的表達差異,并采用血管灌注方法進行血管造影,評價支架內部血管體積。采用免疫熒光染色檢測炎癥標記物iNOS,抑炎標記物Arg-1的表達情況。體外實驗采用細胞共培養(yǎng)的方式檢測PCL/β-TCP對巨噬細胞極化的調控作用以及免疫介導的血管形成改變。實驗分為兩組,空白組（Control）及PCL/β-TCP（PT5）組。將巨噬細胞系Raw264.7接種于材料表面并對其極化水平及分泌改變進行檢測。通過免疫熒光染色檢測M1巨噬細胞標記物iNOS、M2巨噬細胞標記物Arg-1的表達情況。通過RT-qPCR檢測CCR-7,CD206,血管內皮生長因子（VEGF）,血小板源性生長因子（PDGF-BB）,腫瘤壞死因子α（TNF-α）,白細胞介素-10（IL-10）的轉錄情況。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測V... 

【文章來源】：現代生物醫(yī)學進展. 2020,20(11)

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【部分圖文】：

體內血管形成檢測

在體內實驗中，免疫熒光染色結果如下所示，植入后7天，相對于空白組，支架附近炎癥標記物i NOS熒光強度明顯低于對照組（P<0.001），說明M1型巨噬細胞比例減少，抗炎標記物Arg-1熒光強度增強（P<0.001),M2型巨噬細胞比例增多，如圖3A,B。2.4 體外PCL/β-TCP對巨噬細胞極化的影響

如圖5A,RT-qPCR結果顯示巨噬細胞中VEGF轉錄水平下調（P<0.01),PDGF-BB轉錄上調（P<0.001);ELISA結果顯示巨噬細胞VEGF分泌水平下降（P<0.01),PDGF-BB分泌上調（P<0.01）。Transwell遷移實驗如圖5C,D，結果顯示，在巨噬細胞分泌作用下，相同時間內，CMA+PT5培養(yǎng)下穿過Transwell小室的HUVECs數量明顯增加（P<0.001），提示其遷移能力增強。免疫熒光染色結果如圖5B,D，單位面積內成血管標記物CD31熒光強度增強，提示其表達上調，周圍血管形成行為活躍（P<0.001）。圖5 PCL/β-TCP通過巨噬細胞極化對血管形成效應的影響


本文編號：3342976