目的:探究生物可降解材料聚己內(nèi)酯/β-磷酸三鈣（PCL/β-TCP）通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞極化對(duì)骨組織內(nèi)血管生成的作用,為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法:采用3D打印技術(shù)制備試樣并加以表征。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用模型為SD大鼠股骨遠(yuǎn)端植入模型。雙側(cè)植入PCL/β-TCP支架后采取免疫熒光染色觀察支架內(nèi)部成血管標(biāo)記物CD31的表達(dá)差異,并采用血管灌注方法進(jìn)行血管造影,評(píng)價(jià)支架內(nèi)部血管體積。采用免疫熒光染色檢測(cè)炎癥標(biāo)記物iNOS,抑炎標(biāo)記物Arg-1的表達(dá)情況。體外實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞共培養(yǎng)的方式檢測(cè)PCL/β-TCP對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控作用以及免疫介導(dǎo)的血管形成改變。實(shí)驗(yàn)分為兩組,空白組（Control）及PCL/β-TCP（PT5）組。將巨噬細(xì)胞系Raw264.7接種于材料表面并對(duì)其極化水平及分泌改變進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)M1巨噬細(xì)胞標(biāo)記物iNOS、M2巨噬細(xì)胞標(biāo)記物Arg-1的表達(dá)情況。通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)CCR-7,CD206,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）,血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF-BB）,腫瘤壞死因子α（TNF-α）,白細(xì)胞介素-10（IL-10）的轉(zhuǎn)錄情況。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)V... 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,20(11)

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【部分圖文】：

體內(nèi)血管形成檢測(cè)

在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，免疫熒光染色結(jié)果如下所示，植入后7天，相對(duì)于空白組，支架附近炎癥標(biāo)記物i NOS熒光強(qiáng)度明顯低于對(duì)照組（P<0.001），說(shuō)明M1型巨噬細(xì)胞比例減少，抗炎標(biāo)記物Arg-1熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（P<0.001),M2型巨噬細(xì)胞比例增多，如圖3A,B。2.4 體外PCL/β-TCP對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響

如圖5A,RT-qPCR結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞中VEGF轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)（P<0.01),PDGF-BB轉(zhuǎn)錄上調(diào)（P<0.001);ELISA結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞VEGF分泌水平下降（P<0.01),PDGF-BB分泌上調(diào)（P<0.01）。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)如圖5C,D，結(jié)果顯示，在巨噬細(xì)胞分泌作用下，相同時(shí)間內(nèi)，CMA+PT5培養(yǎng)下穿過(guò)Transwell小室的HUVECs數(shù)量明顯增加（P<0.001），提示其遷移能力增強(qiáng)。免疫熒光染色結(jié)果如圖5B,D，單位面積內(nèi)成血管標(biāo)記物CD31熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，提示其表達(dá)上調(diào)，周圍血管形成行為活躍（P<0.001）。圖5 PCL/β-TCP通過(guò)巨噬細(xì)胞極化對(duì)血管形成效應(yīng)的影響


本文編號(hào)：3342976