[目的]表面活性劑與0.25%胰酶共同作用制備脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)。將通過GFP+慢病毒標(biāo)記豬的膽管上皮細(xì)胞與脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)共同培養(yǎng)后使脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)的再細(xì)胞化,為后續(xù)試驗(yàn)奠定材料基礎(chǔ)。[方法]使用GFP+慢病毒標(biāo)記豬膽管上皮細(xì)胞,并用CCK-8法檢測細(xì)胞生長情況。采用標(biāo)記的豬膽管上皮細(xì)胞與人源脫細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合培養(yǎng),制備制備再細(xì)胞化的脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì),利用HE染色、冰凍切片、掃描電鏡、CK-19免疫熒光染色以及DAPI染色觀察膽管細(xì)胞與脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)的復(fù)合生長情況。[結(jié)果]GFP+慢病毒標(biāo)記的膽管上皮細(xì)胞與未標(biāo)記的對照組相比,細(xì)胞增殖情況以及細(xì)胞的生長速度未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在本論文中,我們觀察到標(biāo)記GFP+的豬膽管上皮細(xì)胞呈持續(xù)性生長,在觀察周期中其生長曲線表現(xiàn)為逐漸升高,未觀察到“S”形生長曲線,這與細(xì)胞培養(yǎng)過程中的直接觀察結(jié)果相一致。HE染色、冰凍切片、掃描電鏡、CK-19免疫熒光染色以及DAPI染色提示:人源動(dòng)脈脫細(xì)胞基質(zhì)與豬膽管上皮細(xì)胞的復(fù)合培養(yǎng)自第1周到第4周,人源動(dòng)脈脫細(xì)胞基質(zhì)上豬膽管上皮細(xì)胞逐漸增多,并逐漸融合連接成片狀。部分形成腺體樣結(jié)構(gòu)。[結(jié)論]慢病毒標(biāo)記的膽管上皮細(xì)胞與空白... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【圖文】：

圖３倒置相差顯微鏡下的豬膽管上皮細(xì)胞（Ａ）；熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后的豬??

態(tài)未見明顯改變（圖３Ｂ）。ＣＣＫ８結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后的豬膽管上皮細(xì)胞與原始細(xì)??胞相比細(xì)胞增殖曲線無明顯變化（圖４）。??，ｒ??ｆ?？＇??１?麗＾丄ｗ‘，、ｒ?＇??ｃ．ｉ?－??｝？?—?—?—???ｎ?＊?＼??＾ＴｔａｇｆＴ?ｊｌｒ???—?ｒ?ｉ？ｍｔｉ?■?ｉｎ?ｉ?Ｍ?ｉｍｉｉ?１１?■Ｒｉｊ＇?Ｔ＇－＇?■?？？？??圖２進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染豬膽管細(xì)胞實(shí)驗(yàn)??圖３倒置相差顯微鏡下的豬膽管上皮細(xì)胞（Ａ）；熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后的豬??膽管上皮細(xì)胞可見綠色熒光表達(dá)（Ｂ）?（４０ｘ）。??１８??

３－??＋空白組??■■？轉(zhuǎn)染組?ｊ??Ｉ：??〇?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?１?２?３?４?５?６??圖４兩組細(xì)胞增殖和生長無明顯差異，細(xì)胞生長持續(xù)。生長曲線呈逐漸增大的??趨勢，經(jīng)過一段時(shí)間后，生長曲線沒有出現(xiàn)“ｓ”形。??３人源動(dòng)脈脫細(xì)胞基質(zhì)與豬膽管上皮細(xì)胞的復(fù)合培養(yǎng)??３．１?ＨＥ染色光鏡下觀察結(jié)果??將豬膽管上皮細(xì)胞與脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)復(fù)合培養(yǎng)（圖５）。復(fù)合培養(yǎng)１周后，??可見脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)表面零星幾個(gè)細(xì)胞存在，未融合成片狀，未見腺體樣結(jié)構(gòu)??（圖６Ａ）。復(fù)合培養(yǎng)２周后，可見細(xì)胞結(jié)構(gòu)逐漸增多，位于脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)表??層，但是仍未融合成片狀（圖６Ｂ）。復(fù)合培養(yǎng)后３周后，可見成片狀融合的豬??膽管上皮細(xì)胞，未見腺體樣結(jié)構(gòu)形成（圖６Ｃ）。復(fù)合培養(yǎng)后４周后，可見更多??融合成片的豬膽管上皮細(xì)胞，其中部分己融合形成腺體樣結(jié)構(gòu)（圖６Ｄ）。??園??圖５種植豬膽管上皮細(xì)胞后的脫細(xì)胞動(dòng)脈基質(zhì)??１９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TGF-β1中和抗體對TNBS慢性結(jié)腸炎動(dòng)物模型纖維化的影響[J]. 戴萌,金雷,徐維田,熊毅敏,王一鳴,鄭國榮.  世界華人消化雜志. 2017(09)
[2]Repair of a common bile duct defect with a decellularized ureteral graft[J]. Yao Cheng,Xian-Ze Xiong,Rong-Xing Zhou,Yi-Lei Deng,Yan-Wen Jin,Jiong Lu,Fu-Yu Li,Nan-Sheng Cheng.  World Journal of Gastroenterology. 2016(48)
[3]良性膽管狹窄形成機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 黃峻松,李光早.  東南國防醫(yī)藥. 2013(02)
[4]Repair of bile duct defect with degradable stent and autologous tissue in a porcine model[J]. Yue-Long Liang, Yi-Chen Yu, Kun Liu, Wei-Jia Wang, Jiang-Bo Ying, Yi-Fan Wang, Xiu-Jun Cai, Second Department of General Surgery, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China , Institute of Minimally Invasive Surgery, Zhejiang University, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)
[5]Long-term results of choledochoduodenostomy in benign biliary obstruction[J]. Ajaz A Malik,Shiraz A Rather,Shams UL Bari,Khursheed Alam Wani.  World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2012(02)
[6]不同方法制備脫細(xì)胞血管基質(zhì)的比較[J]. 陳曉波,吳英鋒,段紅永,武欣,陳兵,張淑文,谷涌泉,汪忠鎬.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2011(20)
[7]PTEN抑制增生性瘢痕成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化作用及其機(jī)制[J]. 郭亮,畢勝,王珍祥,陳亮,李喆,黃書鵬,李世榮.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(02)
[8]細(xì)胞因子PDGF和CTGF對炎性疤痕狹窄形成的研究進(jìn)展[J]. 周進(jìn)軍,陶斯斌,葉和軍,孫一洪.  實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床. 2011(01)
[9]TGF-β1在大鼠膽管損傷修復(fù)過程中的表達(dá)[J]. 王國輝,蔣桂星,崔云甫,胡占良.  世界華人消化雜志. 2010(05)
[10]膽管上皮細(xì)胞分泌的VEGF-A在熱缺血再灌注損傷后膽道及其微循環(huán)再生與修復(fù)中的作用[J]. 孫強(qiáng),余元龍,胡澤民,陳宏,吳愛國,朱曉峰.  肝膽胰外科雜志. 2009(04)



本文編號(hào)：3328477