本文關(guān)鍵詞：梯度納米纖維薄膜支架材料復(fù)合人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨軟骨的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：在體外，成功地從健康足月產(chǎn)嬰兒臍帶組織中分離培養(yǎng)出干細(xì)胞，并探討其生物學(xué)特性。構(gòu)建梯度納米纖維薄膜支架材料，觀察與其生物相容性。檢測(cè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合梯度納米纖維薄膜支架材料構(gòu)建細(xì)胞支架復(fù)合體及成骨、成軟骨的效果。 方法:采用酶消化方法獲得干細(xì)胞，并進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)特征。采用MTT法對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線和細(xì)胞增殖毒性進(jìn)行檢測(cè)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞免疫表型。用特殊的干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)體系對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞行體外成骨、軟骨方向誘導(dǎo)，并進(jìn)行鑒定和觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的變化。制備梯度納米纖維薄膜支架材料，并將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與梯度納米纖維薄膜復(fù)合后進(jìn)行聯(lián)合培養(yǎng)，于體外行成骨、軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14天，MTT法測(cè)增殖曲線，倒置光學(xué)顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀察細(xì)胞粘附、成長(zhǎng)情況，并評(píng)價(jià)其組織相容性。并行特異性染色鑒定評(píng)價(jià)細(xì)胞支架材料復(fù)合體成骨-軟骨的效果。 結(jié)果:采用酶消化方法可以成功地得到高純度、高活力人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。MTT檢測(cè)顯示細(xì)胞成長(zhǎng)增殖能力強(qiáng)。流式細(xì)胞儀對(duì)第3代的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果均強(qiáng)烈表達(dá)CD13、CD29、CD44、 CD54、 CD73、 CD90、CD105，不表達(dá)CD14、 CD31、 CD34、 CD40、 CD45和HLA-DR。原子力顯微鏡觀察可見(jiàn)該細(xì)胞具有成熟的間充質(zhì)干細(xì)胞骨架及生物特性。對(duì)其進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后，堿性磷酸酶染色呈強(qiáng)陽(yáng)性，茜素紅染色可見(jiàn)明顯鈣結(jié)節(jié)，Von Kossa礦化結(jié)節(jié)染色呈陽(yáng)性表達(dá)，原子力顯微鏡觀察細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的生物特性；人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成軟骨誘導(dǎo)分化后，甲苯胺蘭染色及阿爾新蘭染色均呈強(qiáng)陽(yáng)性，原子力顯微鏡觀察細(xì)胞具有成軟骨細(xì)胞的生物特性。用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖毒性顯示支架材料浸提液對(duì)種子細(xì)胞沒(méi)有毒性。MTT法、倒置光學(xué)顯微鏡、掃描電子顯微鏡示成骨、軟骨細(xì)胞在梯度納米纖維薄膜支架材料上吸附、增殖能力好，具有良好組織相容性。構(gòu)建的組織工程骨-軟骨通過(guò)特異性染色鑒定，顯示細(xì)胞支架材料復(fù)合體成骨-軟骨的效果良好。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功地構(gòu)建了一種體外穩(wěn)定培養(yǎng)和擴(kuò)增人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。所分離的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成分均一，增殖能力較強(qiáng)，生物學(xué)特性較穩(wěn)定，并能在體外特殊的誘導(dǎo)條件下為成骨、軟骨細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)所構(gòu)建的梯度納米纖維薄膜支架材料是一種具有良好生物相容性的支架材料，該支架材料是一種良好的骨-軟骨移植的替代材料，，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：臍帶 間充質(zhì)干細(xì)胞 組織工程 梯度納米纖維薄膜 支架材料 軟骨缺損
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R687;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-7
• 1 前言7-14
• 1.1 種子細(xì)胞7-10
• 1.2 組織工程中的支架材料10-12
• 1.3 靜電紡絲技術(shù)12-14
• 2 實(shí)驗(yàn)一 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、培養(yǎng)、特性研究14-27
• 2.1 引言14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-21
• 2.5 討論21-22
• 2.6 結(jié)論22-23
• 2.7 附圖23-27
• 3 實(shí)驗(yàn)二 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨、成軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究27-38
• 3.1 引言27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法27-30
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-31
• 3.4 討論31-33
• 3.5 結(jié)論33
• 3.6 附圖33-38
• 4 實(shí)驗(yàn)三 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與梯度納米纖維薄膜支架材料復(fù)合的生物相容性及體外成骨、軟骨的初步研究38-57
• 4.1 引言38
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法38-44
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-47
• 4.4 討論47-49
• 4.5 結(jié)論49
• 4.6 附圖49-57
• 5 全文總結(jié)57-58
• 6 不足與展望58-59
• 7 參考文獻(xiàn)59-64
• 8 英文縮略詞表64-65
• 9 在校期間發(fā)表的論文65-66
• 10 致謝66

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  本文關(guān)鍵詞：梯度納米纖維薄膜支架材料復(fù)合人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨軟骨的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：332825