本文關(guān)鍵詞：利用重組人源膠原蛋白制備生物醫(yī)學(xué)組織工程材料，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本論文以基因工程菌Pichia pastoris高密度發(fā)酵獲得的重組人源膠原蛋白(Recombinant Human-source Collagen, RHSC)為主要研究對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行分離純化和結(jié)構(gòu)表征,并與殼聚糖復(fù)合,通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制備三維多孔狀海綿支架。選擇具有強(qiáng)抗氧化活性的原花青素(Proanthocyanidins, PA)作為交聯(lián)劑,以期提高支架的各方面特性。1.通過(guò)分離純化獲得的RHSC達(dá)到電泳純,測(cè)試顯示：純度99%,回收率93%。采用DSC,紫外光譜,紅外光譜和NMR對(duì)RHSC進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征,并與標(biāo)準(zhǔn)Ⅲ型膠原蛋白比對(duì),確定RHSC具有Ⅲ型膠原蛋白的特征結(jié)構(gòu)。2.通過(guò)改變殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)制備過(guò)程中的因素發(fā)現(xiàn),醋酸的濃度和殼聚糖與RHSC的質(zhì)量比是影響微觀結(jié)構(gòu)形成的關(guān)鍵因素。通過(guò)PA交聯(lián)作用制備的海綿成品具有良好的理化性質(zhì),其內(nèi)部孔徑約為110-160μm,孔隙率92%,吸水率約為3900%；紅外光譜測(cè)試發(fā)現(xiàn),PA與海綿基質(zhì)可以形成穩(wěn)定的氫鍵；DSC和TG分析顯示：通過(guò)交聯(lián)作用,海綿的熱穩(wěn)定性提高；體外酶解實(shí)驗(yàn)表明,交聯(lián)后海綿的抗酶解能力增強(qiáng)。對(duì)海綿進(jìn)行生物相容性研究,內(nèi)容包括細(xì)胞的黏附、遷移、增殖和細(xì)胞形態(tài)等方面,結(jié)果顯示：海綿支架具有較好的細(xì)胞相容性。PA交聯(lián)的殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿是一種理化性質(zhì)良好的生物材料,對(duì)細(xì)胞的黏附、生長(zhǎng)和增殖都有一定的促進(jìn)作用,盡管目前還處于實(shí)驗(yàn)研究階段,但有望進(jìn)一步應(yīng)用于組織工程化器官的研究以及臨床的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：重組人源膠原蛋白 殼聚糖 原花青素 組織工程 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：南京理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：TQ93;R318.08
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 1 緒論10-26
• 1.1 組織工程10-14
• 1.1.1 組織工程的發(fā)展史11
• 1.1.2 組織工程的定義11-12
• 1.1.3 組織工程的原理和方法12
• 1.1.4 組織工程支架材料12-14
• 1.2 細(xì)胞外基質(zhì)14-15
• 1.2.1 細(xì)胞外基質(zhì)主要成分14
• 1.2.2 細(xì)胞外基質(zhì)的作用14-15
• 1.2.3 組織工程支架材料與細(xì)胞外基質(zhì)15
• 1.3 膠原蛋白15-21
• 1.3.1 膠原蛋白的概述15-16
• 1.3.2 膠原蛋白的結(jié)構(gòu)16-17
• 1.3.3 膠原蛋白的分類(lèi)17-19
• 1.3.4 膠原蛋白材料在組織工程中的應(yīng)用19-20
• 1.3.5 重組人源膠原蛋白20-21
• 1.4 殼聚糖21-22
• 1.5 膠原蛋白與殼聚糖22-23
• 1.6 交聯(lián)劑23-24
• 1.7 本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容與意義24-26
• 2 重組人源膠原蛋白的分離純化與結(jié)構(gòu)表征26-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法26-29
• 2.1.1 菌種與主要實(shí)驗(yàn)試劑26
• 2.1.2 主要儀器26-27
• 2.1.3 重組人源膠原蛋白的獲得27-28
• 2.1.4 分析方法28
• 2.1.5 RHSC的微觀形貌觀察28
• 2.1.6 重組人源膠原蛋白的結(jié)構(gòu)表征28-29
• 2.2 結(jié)果與討論29-34
• 2.2.1 RHSC純化結(jié)果29-30
• 2.2.2 RHSC結(jié)構(gòu)表征30-34
• 2.3 本章小結(jié)34-35
• 3 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的調(diào)控35-43
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法35-37
• 3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑35
• 3.1.2 主要儀器35-36
• 3.1.3 分析方法36
• 3.1.4 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的調(diào)控36-37
• 3.2 結(jié)果與討論37-42
• 3.2.1 不同醋酸濃度對(duì)殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的影響37-38
• 3.2.2 不同重組人源膠原蛋白與殼聚糖質(zhì)量比對(duì)海綿基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的影響38-40
• 3.2.3 不同冷凍溫度對(duì)殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的影響40-41
• 3.2.4 不同預(yù)凍時(shí)間對(duì)殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)的影響41-42
• 3.3 本章小結(jié)42-43
• 4 PA交聯(lián)的殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿理化性質(zhì)研究43-54
• 4.1 材料與方法43-46
• 4.1.1 主要材料43
• 4.1.2 儀器設(shè)備43-44
• 4.1.3 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿的制備44
• 4.1.4 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿外觀形貌44-45
• 4.1.5 PA交聯(lián)海綿的紅外分析45
• 4.1.6 DSC和TG分析45
• 4.1.7 吸水率測(cè)試45
• 4.1.8 孔隙率測(cè)試45
• 4.1.9 體外酶解實(shí)驗(yàn)45-46
• 4.2 結(jié)果與討論46-53
• 4.2.1 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿的形貌46-48
• 4.2.2 PA交聯(lián)殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿紅外分析48-49
• 4.2.3 熱學(xué)分析49-51
• 4.2.4 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿成品的吸水率測(cè)試51-52
• 4.2.5 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿成品的孔隙率52
• 4.2.6 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿的酶解實(shí)驗(yàn)52-53
• 4.3 本章小結(jié)53-54
• 5 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿的生物相容性54-63
• 5.1 材料與方法54-57
• 5.1.1 材料54-55
• 5.1.2 溶液的配制55
• 5.1.3 儀器設(shè)備55
• 5.1.4 殼聚糖-重組人源膠原蛋白海綿浸提液的制備55-56
• 5.1.5 細(xì)胞相容性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)56-57
• 5.2 結(jié)果與討論57-62
• 5.2.1 黏附實(shí)驗(yàn)57-58
• 5.2.2 增殖實(shí)驗(yàn)58-59
• 5.2.3 AO/EB熒光染色59-62
• 5.3 本章小結(jié)62-63
• 總結(jié)63-64
• 展望64-65
• 致謝65-66
• 參考文獻(xiàn)66-73
• 附錄73

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 顏永年,崔福齋,胡蘊(yùn)玉;組織工程材料的大段骨快速成形制造[J];材料導(dǎo)報(bào);2001年02期

2 袁磊;閻玉華;;肝組織工程材料的研究進(jìn)展[J];化工中間體;2007年01期

3 王安;任天斌;袁偉忠;李蘭;馮s

本文編號(hào)：329654