研究目的:根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)方法,在無菌環(huán)境下制備載VEGF和萬古霉素的微納米羥基磷灰石/海藻酸鈉/殼聚糖可塑性微球型支架,與BMSCs共培養(yǎng),進(jìn)一步探究該支架對(duì)BMSCs增殖、成骨活性以及黏附性的影響,為該新型支架走進(jìn)臨床奠定前期基礎(chǔ)。研究方法:1.采用全骨髓貼壁篩選法,從SD大鼠雙側(cè)股骨和脛骨分離培養(yǎng)出原代BMSCs,連續(xù)傳代至第3代,對(duì)其進(jìn)行成骨誘導(dǎo),成脂誘導(dǎo)以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.按照前期實(shí)驗(yàn)方法,在無菌環(huán)境下制備載VEGF的海藻酸鈉/殼聚糖多層緩釋微球,將該微球加入載萬古霉素的微納米羥基磷灰石/海藻酸鈉/殼聚糖混合基質(zhì)內(nèi),構(gòu)建無菌的載VEGF和萬古霉素的微納米羥基磷灰石/海藻酸鈉/殼聚糖可塑性微球型支架。3.將該支架與BMSCs共培養(yǎng),采用MTT法檢測微納米羥基磷灰石/海藻酸鈉/殼聚糖支架對(duì)BMSCs增殖活性的影響;檢測支架鈣離子釋放情況,成骨誘導(dǎo)后BMSCs茜素紅染色、ALP染色和ALP活性表達(dá)程度,結(jié)合Real-time PCR檢測在成骨誘導(dǎo)后BMSCs的ALP、BMP2、OPN和Runx2成骨相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄情況,綜合評(píng)價(jià)支架對(duì)BMSCs成骨活性的影響;將BMSCs接種到支架,24小時(shí)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

茜素紅染色可見鈣結(jié)節(jié)

第2章BMSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定12圖2.1BMSCs形態(tài)（A：72h后原代細(xì)胞，B：第1代細(xì)胞，C：第3代細(xì)胞）Figure2.1MorphologyofBMSCs(A:Primarycells;B:Firstgenerationcells;C:Thirdgenerationcells)2.3.2BMSCs成骨分化成骨誘導(dǎo)11天后，茜素紅染色可見明顯鈣結(jié)節(jié)，見圖2.2。圖2.2茜素紅染色可見鈣結(jié)節(jié)Figure2.2Alizarinredstainingshowedcalciumnodules2.3.3BMSCs成脂分化成脂肪誘導(dǎo)7天后，顯微鏡下可見細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)微小脂滴，隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長，脂滴逐漸變大并融合。11天后，油紅O染色可見明顯脂滴，見圖2.3。BAC

油紅O染色可見脂滴


本文編號(hào)：3293945