本文關鍵詞：國產(chǎn)多孔鉭對大鼠軟骨細胞生物學行為及功能變化的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過對醫(yī)用多孔鉭支架材料的物理特性、軟骨細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、軟骨功能活性以及細胞因子分泌功能的影響進行研究，探討多孔鉭材料作為軟骨組織工程支架材料修復軟骨缺損，恢復軟骨組織的生理結構與功能的可行性，為進一步體內(nèi)實驗以及臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法1掃描電鏡觀察多孔鉭材料的形態(tài)特征。取三周SD大鼠四肢關節(jié)軟骨細胞進行分離、培養(yǎng)及鑒定；根據(jù)國標ISO10993-5/ISO10993-12，以F12培養(yǎng)基為浸提介質(zhì)分別制備多孔鉭材料浸提液和多孔鈦材料浸提液，以不同濃度（100%、50%、25%）多孔鉭浸提液培養(yǎng)的軟骨細胞作為實驗組，多孔鈦浸提液培養(yǎng)和完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的軟骨細胞分別作為對照組，通過倒置相差顯微鏡及MTT法觀察材料浸提液對軟骨細胞生長、增殖的影響，檢測多孔鉭材料的細胞毒性。2多孔鉭材料與軟骨細胞進行體外復合培養(yǎng)，經(jīng)倒置相差顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡等觀察軟骨細胞在材料上的形態(tài)、黏附、生長及增殖。3流式細胞儀檢測多孔鉭培養(yǎng)的軟骨細胞的細胞周期及凋亡。4二甲基亞甲基藍比色法定量檢測多孔鉭材料對軟骨細胞合成糖胺多糖的影響。5實時熒光定量PCR檢測多孔鉭材料對軟骨性細胞因子MMP-13、Aggrecan和II型膠原mRNA表達的影響。 結果1多孔鉭形態(tài)特征：多孔鉭外觀灰色、光亮，材料表面及斷面均可見蜂窩狀孔隙，孔隙分布均勻且呈針尖大小。掃描電鏡觀察下多孔鉭材料的微孔直徑約400～600μm（×500），內(nèi)部孔隙約50～200μm（×1000）且相互連通，多孔鉭材料孔隙連通性好且分布較均勻，結構類似于松質(zhì)骨構架。2體外細胞毒性檢測：隨著培養(yǎng)時間的延長，各濃度多孔鉭浸提液組、多孔鈦浸提液組及完全培養(yǎng)基組的細胞生長無明顯差異，軟骨細胞形態(tài)均正常，貼壁增殖良好，相同時間點各濃度多孔鉭浸提液組和兩組對照組的細胞增殖活力差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。3多孔鉭材料與軟骨細胞復合培養(yǎng)：倒置相差顯微鏡下可見多孔鉭材料的邊緣及培養(yǎng)板底部黏附大量軟骨細胞；掃描電鏡可見軟骨細胞在多孔鉭表面及孔隙內(nèi)能夠良好的黏附、伸展及增殖，細胞形態(tài)多樣，細胞間可相互連接，且能夠正常分泌細胞外基質(zhì)；透射電鏡顯示軟骨細胞內(nèi)的超微結構大小及形態(tài)均正常，無明顯改變。4軟骨細胞周期及細胞凋亡檢測：多孔鉭培養(yǎng)組及兩組對照組細胞均為正常二倍體細胞，三組細胞周期分布相似；多孔鉭組及對照組的細胞凋亡率及壞死細胞率差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。5軟骨細胞糖胺多糖定量檢測：細胞在多孔鉭材料上能夠保持軟骨細胞特異表型，且分泌GAG。6軟骨細胞分泌功能檢測：實時熒光定量PCR檢測多孔鉭材料對MMP-13和II型膠原mRNA的表達與完全培養(yǎng)基對照組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；Aggrecan mRNA的表達上調(diào)，，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結論1軟骨細胞在多孔鉭浸提液中培養(yǎng)生長、增殖狀態(tài)良好，說明多孔鉭材料對軟骨細胞無毒性。2多孔鉭材料與軟骨細胞復合培養(yǎng)，細胞在其表面與孔隙內(nèi)黏附、生長及增殖良好，能夠保持細胞特異表型且正常分泌糖胺多糖，說明多孔鉭具有良好的生物相容性。3軟骨細胞在與多孔鉭材料復合培養(yǎng)后，仍然均為二倍體細胞，且S期細胞數(shù)量增多，同時材料對細胞凋亡無促進作用，說明多孔鉭材料對軟骨細胞周期及凋亡無明顯影響，具有良好的細胞相容性。4多孔鉭材料對軟骨細胞無明顯的炎癥反應，可促進細胞正常分泌II型膠原，同時Aggrecan mRNA的表達上調(diào)，說明多孔鉭具有良好的生物相容性。
【關鍵詞】：多孔鉭 支架 生物相容性 軟骨組織工程
【學位授予單位】：河北聯(lián)合大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 實驗研究13-55
• 1.1 材料與方法13-24
• 1.1.1 實驗動物及材料13-15
• 1.1.2 掃描電鏡觀察多孔鉭材料的形態(tài)特征15
• 1.1.3 三周 SD 大鼠軟骨細胞培養(yǎng)及鑒定15-17
• 1.1.4 MTT 法檢測多孔鉭對軟骨細胞的增殖作用17-18
• 1.1.5 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)物的制備18
• 1.1.6 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)掃描電鏡觀察18-19
• 1.1.7 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)透射電鏡觀察19
• 1.1.8 流式細胞儀檢測多孔鉭對軟骨細胞細胞周期的影響19-20
• 1.1.9 流式細胞儀檢測多孔鉭對軟骨細胞凋亡的影響20-21
• 1.1.10 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)分泌的糖胺多糖含量（GAG）檢測21-22
• 1.1.11 實時定量 PCR 檢測多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)分泌的 MMP-13、Aggrecan和 Collagen II mRNA 表達的影響22-24
• 1.2 結果24-43
• 1.2.1 多孔鉭及多孔鈦材料的物理特性24-26
• 1.2.2 三周 SD 大鼠軟骨細胞的形態(tài)特征觀察及其鑒定26-29
• 1.2.3 MTT 法檢測多孔鉭對軟骨細胞增殖的影響29-31
• 1.2.4 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)形態(tài)特征觀察31-36
• 1.2.5 流式細胞儀檢測多孔鉭對軟骨細胞細胞周期的影響36-38
• 1.2.6 流式細胞儀檢測多孔鉭對軟骨細胞凋亡的影響38-40
• 1.2.7 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)的功能檢測40-41
• 1.2.8 實時定量 PCR 檢測多孔鉭對軟骨細胞分泌 MMP-13、Aggrecan 和 Collagen II mRNA 表達影響41-43
• 1.3 討論43-50
• 1.3.1 多孔鉭的物理特性43-44
• 1.3.2 種子細胞的選擇及鑒定44-45
• 1.3.3 多孔鉭對軟骨細胞毒性觀察45-46
• 1.3.4 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)形態(tài)特征觀察46-47
• 1.3.5 多孔鉭對軟骨細胞細胞周期及凋亡的影響47-48
• 1.3.6 多孔鉭與軟骨細胞復合培養(yǎng)的功能檢測48-49
• 1.3.7 多孔鉭對軟骨細胞 MMP-13、Aggrecan 和 Collagen II mRNA 表達的影響49-50
• 1.4 結論50
• 參考文獻50-55
• 第2章 綜述 多孔金屬鉭在生物醫(yī)學領域的應用進展55-59
• 2.1 多孔金屬鉭的生物相容性56
• 2.2 多孔金屬鉭的生物學優(yōu)勢56-57
• 2.3 多孔金屬鉭的臨床應用發(fā)展57-58
• 參考文獻58-59
• 附錄 醫(yī)療器械生物學評價59-62
• 致謝62-63
• 導師簡介63-64
• 作者簡介及在學成果64-65
• 學位論文數(shù)據(jù)集65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張艷梅;王佃亮;曾虹燕;孫晉偉;;3D仿生組織工程支架及其在再生醫(yī)學中的應用[J];解放軍醫(yī)學雜志;2011年06期

2 萬書健;蘇儉生;;3種鑄造金屬全冠戴用后對外周靜脈血淋巴細胞凋亡的影響[J];口腔醫(yī)學;2009年02期

3 陳康;王大平;;組織工程軟骨修復關節(jié)軟骨損傷研究新進展[J];中國矯形外科雜志;2012年08期

4 劉寧;錢齊榮;徐煒;彭錦輝;周嶸;;多孔鉭支架與磷酸三鈣復合骨膜移植修復軟骨缺損的比較[J];中國組織工程研究;2012年43期

  本文關鍵詞：國產(chǎn)多孔鉭對大鼠軟骨細胞生物學行為及功能變化的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：323489