牙周病是一種多因素共同作用的感染性、破壞性口腔疾病,牙菌斑微生物的刺激以及機(jī)體自身的免疫炎癥反應(yīng)是其發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。通過潔治、刮治等機(jī)械方法加上抗菌藥物的輔助治療可以有效控制感染,但是對(duì)于已破壞的牙周組織的修復(fù)再生作用仍十分有限。研制一種合適的藥物劑型,既能控制病原微生物感染,又能調(diào)節(jié)宿主防御功能,阻斷疾病的發(fā)展,同時(shí)還能誘導(dǎo)成骨細(xì)胞活性,修復(fù)骨缺損,這是牙周病學(xué)和口腔修復(fù)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。電紡纖維具有較高的孔隙率和表面體積比、以及與細(xì)胞外基質(zhì)類似的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),有利于細(xì)胞的粘附和定植,是一種理想的載藥支架材料。全身用藥容易導(dǎo)致耐藥和菌群失調(diào)及其他一些毒/副作用的出現(xiàn),米諾環(huán)素在四環(huán)素中抗菌活性最強(qiáng),越來越多的資料支持使用小劑量米諾環(huán)素治療牙周病,但目前關(guān)于米諾環(huán)素與成骨細(xì)胞的研究相對(duì)較少,現(xiàn)有研究中關(guān)于有效藥物濃度的研究尚無統(tǒng)一定論。如果米諾環(huán)素在維持有效抑菌活性的同時(shí)對(duì)成骨細(xì)胞的功能活性也有一定促進(jìn)作用,對(duì)于牙周骨缺損的修復(fù)治療效果將更加理想。本實(shí)驗(yàn)擬研究抑菌濃度米諾環(huán)素對(duì)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞功能活性的影響,同時(shí)運(yùn)用靜電紡絲技術(shù)合成載米諾環(huán)素的纖維支架材料,并對(duì)其物理化學(xué)性能進(jìn)行分... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

米諾環(huán)素化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig1.1Thechemicalstructureofminocycline

A.顱骨及骨縫 B.頂骨圖 1.2 乳鼠顱頂骨解剖示意圖Fig 1.2 Anatomic diagram of cranial parietal bone in newborn rats.2.3 體外培養(yǎng)原代成骨細(xì)胞的鑒定將生長(zhǎng)良好的第三代成骨細(xì)胞以 2×104個(gè)/孔，接種于 24 孔板，預(yù)培養(yǎng)，于第 2d 加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，體積分?jǐn)?shù)為 5%CO2、37℃條件孵育，間隔 換一下培養(yǎng)液，并在鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)，在第 7d 時(shí)通過堿性磷酸酶行細(xì)胞鑒定，具體步驟如下：①按照試劑盒操作說明書配制相應(yīng)體積CIP/NBT 染色工作液。②從孵育箱內(nèi)取出 24 孔板，用移液槍小心吸去孔板養(yǎng)基，PBS 漂洗 2-3 次。③向 24 孔板加入配制的 BCIP/NBT 染色工作液，00ul 左右，以充分覆蓋細(xì)胞為宜。④室溫避光孵育 30min，可見孔板底部呈色。⑤用移液槍小心吸去染色液，PBS 洗滌 2 次，3-5min/次，倒置相差顯

2 結(jié)果2.1 成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)和鑒定倒置相差顯微鏡下可見：原代培養(yǎng)第 3d 的時(shí)候，便可以看見碎骨塊周圍開始有成骨細(xì)胞爬出，貼壁生長(zhǎng)，沿著骨塊邊緣向外呈放射狀增殖擴(kuò)散（圖 1.3A），5到 7d 的時(shí)候細(xì)胞數(shù)量明顯增多，占整個(gè)培養(yǎng)瓶底的 70%-80%左右（圖 1.3B），細(xì)胞形態(tài)大多呈不規(guī)則狀，有多邊形或三角形等，可見較多突起，細(xì)胞核多為卵圓形且位于細(xì)胞中央部位，可見 1-2 個(gè)核仁，細(xì)胞質(zhì)豐富清晰。堿性磷酸酶染色結(jié)果為陽性，可以看見較多的藍(lán)黑色顆粒沉積在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的堿性磷酸酶活性部位（圖 1.3C）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3220706