骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨缺損修復(fù)的前提條件,如何提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨缺損區(qū)域再生中發(fā)揮的作用,是研究缺損修復(fù)的核心問(wèn)題。我們?cè)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),利用骨組織工程支架材料搭載小干擾RNA及局部應(yīng)用神經(jīng)肽等多種方法調(diào)控細(xì)胞微環(huán)境,進(jìn)而提高大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移,分化和增殖能力。實(shí)驗(yàn)一殼聚糖搭載兩種小干擾RNA對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨成血管分化的作用目的:將兩種分別促進(jìn)成骨和成血管的si RNA同時(shí)搭載到殼聚糖凝膠中,制成新的骨組織工程支架材料,研究此種新型支架材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用。方法:制備殼聚糖凝膠,用脂質(zhì)體2000搭載si Ckip-1和si Flt-1、單獨(dú)搭載si Ckip-1、單獨(dú)搭載si Flt-1,搭載si NC導(dǎo)入殼聚糖凝膠中,將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種至之前4組搭載si RNA的支架材料及不搭載任何si RNA的殼聚糖凝膠中,觀察這五組支架材料對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的作用。結(jié)果:RT-q PCR分析顯示si Ckip-1+si Flt-1組中ALP、OCN以及VEGF的表達(dá)顯著高于其余四組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）,免疫熒光染色的結(jié)果顯示,s... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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前言
文獻(xiàn)回顧
實(shí)驗(yàn)一 殼聚糖搭載兩種小干擾RNA對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨成血管分化的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    2 方法
        2.1 殼聚糖凝膠制備
        2.2 搭載siRNA支架材料制備
        2.3 搭載siRNA的支架材料降解曲線
        2.4 細(xì)胞培養(yǎng)鑒定
        2.5 細(xì)胞附著和增殖
        2.6 siRNA和細(xì)胞的共區(qū)域化
        2.7 RT-qPCR分析檢測(cè)靶基因及成骨成血管基因表達(dá)
        2.8 免疫熒光檢測(cè)成骨成血管相關(guān)蛋白表達(dá)
        2.9 細(xì)胞外基質(zhì)礦化
        2.10 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 搭載siRNA后殼聚糖凝膠的表征
        3.2 細(xì)胞表型鑒定結(jié)果
        3.3 細(xì)胞附著和增殖
        3.4 si RNA 和細(xì)胞的共區(qū)域化
        3.5 RT-qPCR分析檢測(cè)結(jié)果
        3.6 細(xì)胞外基質(zhì)礦化與免疫熒光分析
    4 討論
實(shí)驗(yàn)二 體內(nèi)植入搭載兩種小干擾RNA的殼聚糖對(duì)大鼠顱骨缺損修復(fù)的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    2 方法
        2.1 支架材料植入大鼠顱骨缺損區(qū)域
        2.2 Micro-CT檢測(cè)成骨效果
        2.3 Van Gieson染色
        2.4 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 顱骨缺損再生效果
    4 討論
實(shí)驗(yàn)三CGRP對(duì)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞遷移，增殖和成骨分化的影響
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    2 方法
        2.1 細(xì)胞分離培養(yǎng)鑒定
        2.2 CGRP對(duì)BMSCs中SDF-1 的分泌和表達(dá)的影響
        2.3 Transwell檢測(cè)CGRP對(duì)BMSCs遷移能力的促進(jìn)作用
        2.4 BrdU檢測(cè)CGRP對(duì)BMSCs增殖能力的促進(jìn)作用
        2.5 CGRP對(duì)BMSCs成骨分化的作用
        2.6 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 CGRP對(duì)大鼠BMSCs分泌SDF-1 和SDF-1mRNA表達(dá)的影響
        3.2 CGRP對(duì)大鼠BMSCs遷移能力的影響
        3.3 CGRP對(duì)大鼠BMSCs增殖能力的影響
        3.4 CGRP對(duì)BMSCs成骨分化的作用
    4 討論
實(shí)驗(yàn)四 局部注射降鈣素基因相關(guān)肽CGRP對(duì)SD大鼠下頜骨單側(cè)牽張成骨效果的影響
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 手術(shù)器械
        1.4 主要材料及儀器
    2 方法
        2.1 牽張器植入術(shù)
        2.2 動(dòng)物分組及標(biāo)本獲得
        2.3 Micro-CT分析
        2.4 組織形態(tài)學(xué)觀察及定量分析
        2.5 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 大體標(biāo)本觀察
        3.2 Micro-CT分析
        3.3 骨組織學(xué)觀察
    4 討論
實(shí)驗(yàn)五 局部應(yīng)用CGRP對(duì)下頜骨牽張中間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)員的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 手術(shù)器械
        1.4 主要材料及儀器
    2 方法
        2.1 手術(shù)步驟
        2.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)Nestin表達(dá)
        2.3 外周血CD29陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.4 外周血中SDF-1 含量檢測(cè)
        2.5 qRT-RCR檢測(cè)牽張區(qū)SDF-1mRNA的表達(dá)
        2.6 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Nestin的表達(dá)
        3.2 外周血CD29陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量
        3.3 外周血中的SDF-1 的表達(dá)
        3.4 牽張區(qū)骨組織SDF-1mRNA表達(dá)
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The role of vascular endothelial growth factor in ossification[J]. Ricky Wong,Alex Wenden,A Bakr M Rabie.  International Journal of Oral Science. 2012(02)
[2]成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞的力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(英文)[J]. 張舒,曹新生,王冰.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(24)



本文編號(hào)：3216118