目前,采用細胞移植療法將神經(jīng)干／祖細胞（NS/PCs）移植入帕金森�。≒D）受損部位可在一定程度上起到修復(fù)作用,但此方法仍存在缺陷。雖然NS/PCs具有分化成PD缺失的多巴胺（DA）能神經(jīng)元潛能,但是移植后存活時間短,分化能力有限,不足以與周圍組織建立功能聯(lián)系,還需進一步完善。為了提高NS/PCs的存活和定向分化能力,體外構(gòu)建可供NS/PCs擴增、分化的三維支架材料尤為重要。本文采用冷凍干燥法制備了不同比例殼聚糖-明膠-透明質(zhì)酸-硫酸肝素（C-G-Ha-HS）復(fù)合支架,通過紅外、孔徑、孔隙率、吸水率、粘附率、降解性能測定,篩選出理想支架,經(jīng)層粘連蛋白（LN）表面修飾,構(gòu)建NS/PCs三維培養(yǎng)體系,同時考察了LN修飾的復(fù)合支架與NS/PCs的生物相容性及三維條件原兒茶酸（PCA）對NS/PCs定向分化的影響。傅里葉紅外檢測顯示,所有支架交聯(lián)成功,交聯(lián)后支架上的酰胺基、磺酸基、酯鍵、酸酐能提供大量細胞粘附、遷移位點,促進NS/PCs分化；支架物理表征顯示,C-G-Ha-HS復(fù)合支架孔徑在120～130gm之間,孔隙率達到92%以上,具備吸水能力且易降解,更適合體外培養(yǎng)NS/PCs; CCK... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻綜述
    1.1 帕金森病
    1.2 種子細胞-神經(jīng)干/祖細胞
        1.2.1 NS/PCs的概念
        1.2.2 NS/PCs的生物學(xué)特征
        1.2.3 NS/PCs的特異性標(biāo)記物
        1.2.4 NS/PCs的體外培養(yǎng)
        1.2.5 多巴胺與Nurr1基因
        1.2.6 NS/PCs分化的影響因素
    1.3 組織工程支架材料
        1.3.1 支架材料的特征
        1.3.2 支架材料的種類
        1.3.3 支架材料的制備方法
        1.3.4 支架材料的表面修飾
        1.3.5 組織工程支架材料的應(yīng)用
    1.4 原兒茶酸
        1.4.1 原兒茶酸簡介
        1.4.2 原兒茶酸的藥理作用
    1.5 本文選題依據(jù)
2 NS/PCs的原代分離與體外培養(yǎng)
    2.1 實驗材料及方法
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗藥品及試劑
        2.1.3 實驗儀器與裝置
        2.1.4 實驗溶液的配制方法
    2.2 NS/PCs的原代、傳代培養(yǎng)及檢測
        2.2.1 NS/PCs的體外獲得及培養(yǎng)
        2.2.2 NS/PCs的傳代培養(yǎng)
        2.2.3 NS/PCs生長曲線的測定
        2.2.4 NS/PCs免疫細胞化學(xué)鑒定
    2.3 實驗結(jié)果與討論
        2.3.1 體外培養(yǎng)的NS/PCs
        2.3.2 NS/PCs的生長曲線
        2.3.3 NS/PCs分化潛能鑒定
    2.4 本章小結(jié)
3 C-G-Ha-HS復(fù)合支架的制備及表面修飾
    3.1 實驗材料及方法
        3.1.1 實驗藥品和試劑
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 復(fù)合支架材料的制備
        3.2.2 復(fù)合支架的官能團測定
        3.2.3 復(fù)合支架的形貌觀察
        3.2.4 復(fù)合支架孔徑、孔隙率、吸水率、粘附率的測定
        3.2.5 復(fù)合支架降解能力的測定
        3.2.6 C-G-Ha-HS復(fù)合支架的表面修飾
        3.2.7 C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)的細胞分布觀察
        3.2.8 統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結(jié)果與討論
        3.3.1 復(fù)合支架的紅外譜圖
        3.3.2 復(fù)合支架的掃描電鏡圖片
        3.3.3 復(fù)合支架的孔徑、孔隙率、吸水率、粘附率
        3.3.4 復(fù)合支架的體外降解率
        3.3.5 NS/PCs在C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)的分布情況
    3.4 本章小結(jié)
4 LN修飾的C-G-Ha-HS復(fù)合支架協(xié)同PCA對NS/PCs分化的影響
    4.1 實驗材料及方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗所需儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 NS/PCs與C-G-Ha-HS復(fù)合支架的掃描電鏡觀察
        4.2.2 C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)NS/PCs的活力檢測
        4.2.3 NS/PCs在C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)生長曲線的檢測
        4.2.4 分化細胞的免疫細胞化學(xué)鑒定
        4.2.5 統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結(jié)果與討論
        4.3.1 NS/PCs與C-G-Ha-HS復(fù)合支架的掃描電鏡照片
        4.3.2 C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)的細胞活力
        4.3.3 C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)NS/PCs的生長曲線
        4.3.4 C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)NS/PCs的顯微形態(tài)觀察
        4.3.5 C-G-Ha-HS復(fù)合支架內(nèi)NS/PCs的分化能力
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點與展望
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]原兒茶酸調(diào)節(jié)神經(jīng)干/祖細胞分化的作用研究[J]. 關(guān)水,李海華,葛丹,劉天慶,馬學(xué)虎.  中國藥理學(xué)通報. 2012(09)
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[3]Co-transplantation of macaque autologous Schwann cells and human embryonic nerve stem cells in treatment of macaque Parkinson’s disease[J]. Ying Xia,Chengchuan Jiang,Zuowei Cao,Keshan Shi,Yang Wang.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2012(01)
[4]膠原蛋白-硫酸肝素神經(jīng)生物支架材料的制備[J]. 李曉龍,穆長征,馬云勝.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(12)
[5]中藥制劑—肌萎靈注射液對神經(jīng)干細胞的促分化作用[J]. 楊萍,王繼明,應(yīng)大君,宋林,李振強,吳以嶺.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2005(02)

碩士論文
[1]原兒茶酸對體外神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響[D]. 李海華.大連理工大學(xué) 2012
[2]神經(jīng)干細胞在膠原凝膠及膠原—殼聚糖支架內(nèi)的培養(yǎng)[D]. 陸瑞欣.大連理工大學(xué) 2009
[3]銀杏內(nèi)酯B對神經(jīng)干細胞分化的影響及其機制研究[D]. 王永紅.第三軍醫(yī)大學(xué) 2007



本文編號：3204660