人角膜基質(zhì)約占全角膜厚度的90%,主要成分為人角膜基質(zhì)細(xì)胞、膠原纖維及蛋白聚糖,在結(jié)構(gòu)上由200-250層膠原纖維板層平行排列而成,且處于半脫水狀態(tài),在維持角膜透明及允許光線穿過中具有不可替代的作用。角膜基質(zhì)缺損所致疾病具有患病率高、致盲性強(qiáng)和臨床治療困難等特點(diǎn),在我國400余萬、全世界5500余萬角膜盲患者中,多數(shù)患者均為角膜基質(zhì)缺損性疾病所致盲。目前,這類疾病只能通過角膜移植術(shù)來治療,但由于捐獻(xiàn)角膜數(shù)量的極其有限,絕大多數(shù)患者因得不到供體角膜而無法復(fù)明。體外重建的組織工程人角膜基質(zhì)可以作為人角膜基質(zhì)的等效替代物,使角膜基質(zhì)異常性疾病的臨床移植和治療成為可能,是從根本上解決供體角膜高度匱乏問題和讓眾多角膜基質(zhì)異�；颊咧匾姽饷鞯奈ㄒ幌Ｍ�,也是決定完整組織工程人角膜能否體外重建成功的關(guān)鍵。為了探討利用去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)體外重建組織工程人角膜基質(zhì)的可行性,本文通過建立去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)的制備技術(shù),并以業(yè)已建立的非轉(zhuǎn)染、無致瘤性人角膜基質(zhì)細(xì)胞系細(xì)胞為種子細(xì)胞、以所制備的去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)為載體支架,進(jìn)行組織工程人角膜基質(zhì)的體外重建研究,為利用人角膜基質(zhì)細(xì)胞和去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)規(guī)�；w外重建組織工程人... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 組織工程角膜
    2 TE-HCS 的研究現(xiàn)狀
第二章 豬角膜的取材以及去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)的制備
    1 實(shí)驗(yàn)用品
        1.1 材料
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)耗材及試劑
        1.4 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 豬角膜基質(zhì)的取材以及去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)的制備
        2.2 石蠟切片
        2.3 HE 染色
        2.4 掃描電鏡觀察
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 經(jīng)凍干處理后去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)體外觀察
        3.2 去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)HE 染色
        3.3 掃描電鏡結(jié)果
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第三章 去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)與人角膜基質(zhì)細(xì)胞的生物相容性研究
    1 實(shí)驗(yàn)用品
        1.1 材料
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)耗材及試劑
        1.4 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 人角膜基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)方法
        2.2 人角膜基質(zhì)細(xì)胞系細(xì)胞免疫熒光檢測
        2.3 接種角膜基質(zhì)細(xì)胞前去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)的處理
        2.4 以脫細(xì)胞豬角膜基質(zhì)作為載體支架接種人角膜基質(zhì)細(xì)胞
        2.5 石蠟切片
        2.6 HE 染色
        2.7 免疫組織化學(xué)染色
        2.8 掃描電鏡觀察
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 人角膜基質(zhì)細(xì)胞系細(xì)胞的生長特性
        3.2 人角膜基質(zhì)細(xì)胞系細(xì)胞免疫熒光檢測
        3.3 接種角膜基質(zhì)細(xì)胞前去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)的處理結(jié)果
        3.4 接種細(xì)胞的生長特性
        3.5 組織工程人角膜基質(zhì)HE 染色
        3.6 免疫組織化學(xué)染色
        3.7 重建TE-HCS 掃描電鏡結(jié)果
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第四章 組織工程人角膜基質(zhì)的體外重建及鑒定
    1 實(shí)驗(yàn)用品
        1.1 材料
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)耗材及試劑
        1.4 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 接種角膜基質(zhì)細(xì)胞前去細(xì)胞豬角膜基質(zhì)的處理
        2.2 以脫細(xì)胞豬角膜基質(zhì)作為載體支架接種人角膜基質(zhì)細(xì)胞
        2.3 組織工程人角膜基質(zhì)冰凍切片
        2.4 石蠟切片
        2.5 HE 染色
        2.6 掃描電鏡觀察
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 脫細(xì)胞豬角膜基質(zhì)接細(xì)胞前的處理觀察
        3.2 接種細(xì)胞的生長特性
        3.3 組織工程人角膜基質(zhì)冰凍切片觀察
        3.4 組織工程人角膜基質(zhì)HE 染色
        3.5 重建TE-HCS 掃描電鏡結(jié)果
    4 討論
    5 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組織工程人角膜內(nèi)皮在維持新西蘭兔角膜透明中的效果研究[J]. 樊廷俊,趙君,王晶,楊洪收,叢日山,楊秀霞,史偉云,王宜強(qiáng).  山東大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版). 2010(03)
[2]轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶交聯(lián)膠原凝膠構(gòu)建三維角膜基質(zhì)[J]. 李燕,陳建蘇,李曉霞,王偉.  眼科研究. 2009(10)
[3]脫細(xì)胞豬角膜基質(zhì)體外支持皮膚細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 林旭初,孫濤,金巖,惠延年,孟浩.  眼科新進(jìn)展. 2009(08)
[4]膠原-殼聚糖和角膜基質(zhì)細(xì)胞復(fù)合膜的構(gòu)建及其生物相容性[J]. 賈卉,王嬌,胡源,張媛,張冰.  吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(03)
[5]脫細(xì)胞角膜基質(zhì)的制備及其超微結(jié)構(gòu)[J]. 馮云,許永根,張弛,李穎,吳樂萌,王薇.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2009(04)
[6]膠原-硫酸軟骨素-透明質(zhì)酸真皮支架材料修復(fù)兔角膜基質(zhì)缺損的研究[J]. 王偉紅,張米,許小林,余春艷,金巖.  組織工程與重建外科雜志. 2009(01)
[7]殼聚糖基角膜細(xì)胞載體的制備及其細(xì)胞相容性[J]. 高興爽,劉萬順,韓寶芹,位曉娟.  生物工程學(xué)報(bào). 2008(08)
[8]脫細(xì)胞豬角膜基質(zhì)體外支持角膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞的生長(英文)[J]. 林旭初,惠延年,孟浩,張永杰,金巖.  國際眼科雜志. 2008(07)
[9]纖維蛋白膠與兔角膜3種細(xì)胞構(gòu)建組織工程細(xì)胞片研究[J]. 梁曉東,陳建蘇,鄭佩娥,陳小琳.  中國病理生理雜志. 2008(04)
[10]角膜基質(zhì)脫細(xì)胞處理與相容性實(shí)驗(yàn)研究[J]. 姜河,卿素珠,金巖,孟浩,張銳紅,成醒民.  西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2007(06)



本文編號：3204645