本文關(guān)鍵詞：胺基聚甲基丙烯酸甘油酯季銨鹽的合成及其作為基因載體的性能和抗菌活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來，支化和超支化大分子引起人們越來越多的關(guān)注，主要是因為它具有比較固定的結(jié)構(gòu)以及多價態(tài)組分比例較高，使得這些具有納米尺寸的材料有望作為非病毒載體。 線性和八臂胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯（PGOHMAs）由聚甲基丙烯酸縮水甘油酯（PGMA）與異丙胺（MEA），二乙胺（DEA），二正丙胺（DPA）通過開環(huán)反應(yīng)生成。對其所含的叔胺用碘甲烷通過季銨化反應(yīng)進行修飾，生成季銨鹽，簡稱QPGMAs，QPGMA與pDNA（質(zhì)粒）在不同的N/P摩爾比例條件下形成納米粒子。此外，異丙胺修飾的八臂PGMA與pDNA形成的納米粒子作為陽性對照。掃描電鏡顯示QPGMA/pDNA復(fù)合物呈球形，動態(tài)光散射測出其粒徑比S8-MEA/pDNA要更小，同時，凝膠電泳阻滯實驗與EB置換實驗顯示QPGMA/pDNA可以在更低的N/P有條件下壓縮DNA，用Huh-7cells做體外實驗發(fā)現(xiàn)：與S8-MEA/pDNA復(fù)合物相比，QPGMA/pDNA復(fù)合物細胞毒性低和轉(zhuǎn)染效率高。細胞攝取實驗結(jié)果顯示QPGMA可以提高DNA的攝取，盡管QPGMA/pDNA在溶酶體中的逃逸效率略低于S8-MEA/pDNA，但是，總的來說，將胺基PGOHMA季銨化形成的季銨鹽可以作為有效地基因傳遞載體。 采用核磁、紅外、GPC、熱重以及溶解度測試對QPGMAs的物化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)進行表征，胺基PGOHMA的胺基取代率由元素分析結(jié)果計算所得，季銨鹽的季銨化度（DQ）由X射線光電子能譜分析（XPS）測得，根據(jù)溶解度結(jié)果所得，S8-MEA是唯一的一種水的胺基PHOHMA，因此，用它作為QPGMA的抗菌對照。這些PGMA衍生物的抗菌活性是通過最低抑菌濃度（MIC）和抑菌率（BIR）來衡量的，測試菌種為大腸桿菌（Escherichia coli）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），結(jié)果顯示，QPGMAs比S8-MEA的抗菌活性強，且在弱堿性條件下，隨著DQ的增加，抗菌活性增強，此外，，研究發(fā)現(xiàn)化學結(jié)構(gòu)與pH都會影響抗菌活性。
【關(guān)鍵詞】：陽離子聚合物 胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯 季銨化 基因載體 抗菌活性
【學位授予單位】：天津理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：O633.2;R318.08
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第一章 緒論11-20
• 1.1 基因治療概述11
• 1.2 非病毒基因載體-物理方法11-12
• 1.2.1 注射裸 DNA11
• 1.2.2 電穿孔（Electroporation）11-12
• 1.2.3 基因槍（Gene gun）12
• 1.2.4 超聲介導(dǎo)法（Ultrasound）12
• 1.3 非病毒載體-化學方法12-15
• 1.3.1 脂質(zhì)體12-13
• 1.3.2 聚 L-賴氨酸（PLL）13
• 1.3.3 聚乙烯亞胺（PEI）13-14
• 1.3.4 樹狀高分子14
• 1.3.5 殼聚糖14
• 1.3.6 陽離子聚合物基因載體功能化修飾14-15
• 1.4 高分子抗菌材料15-18
• 1.4.1 含氮季銨鹽高分子15-16
• 1.4.2 含胍類高分子16
• 1.4.3 鹵代胺類高分子16-17
• 1.4.4 含磷酸基和苯磺酸基高分子17
• 1.4.5 化學改性的抗菌高分子17
• 1.4.6 含有機抗菌組分的高分子17-18
• 1.5 課題來源及選題依據(jù)18-20
• 第二章 胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯及其季銨鹽的合成20-27
• 2.1 實驗儀器及試劑20-21
• 2.1.1 實驗儀器與主要設(shè)備20
• 2.1.2 材料與試劑20-21
• 2.2 胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯及其季銨鹽的合成與表征21-23
• 2.2.1 胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯及其季銨鹽的合成21-23
• 2.2.2 產(chǎn)物的表征23
• 2.2.3 胺基含量的測定23
• 2.3 結(jié)果與討論23-26
• 2.4 結(jié)論26-27
• 第三章 胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯季銨鹽作為基因載體性能的研究27-39
• 3.1 實驗儀器與試劑27-28
• 3.1.1 實驗儀器與主要設(shè)備27
• 3.1.2 材料與主要試劑27-28
• 3.2 質(zhì)粒 PEGFP-N1 的準備28-29
• 3.2.1 感受態(tài)細胞的制備28
• 3.2.2 質(zhì)粒 PEGFP-N1 的轉(zhuǎn)化28-29
• 3.2.3 質(zhì)粒 PEGFP-N1 的擴增、提取與鑒定29
• 3.2.4 質(zhì)粒 DNA 濃度的測定29
• 3.3 高分子與質(zhì)粒 DNA 復(fù)合物的制備29
• 3.4 復(fù)合物的表征29-31
• 3.4.1 動態(tài)光散射（DLS）30
• 3.4.2 溴化乙錠（EB）置換實驗30
• 3.4.3 凝膠電泳阻滯實驗30
• 3.4.4 掃描電鏡（SEM）30
• 3.4.5 細胞毒性試驗30-31
• 3.4.6 體外轉(zhuǎn)染實驗31
• 3.4.7 流式細胞儀分析31
• 3.4.8 細胞攝取實驗31
• 3.5 結(jié)果與討論31-38
• 3.5.1 粒徑與電勢31-33
• 3.5.2 溴化乙錠置換實驗33
• 3.5.3 掃描電鏡33-34
• 3.5.4 瓊脂糖凝膠電泳阻滯實驗34
• 3.5.5 復(fù)合物的細胞毒性實驗與轉(zhuǎn)染實驗34-36
• 3.5.6 細胞攝取實驗36-37
• 3.5.7 CLSM 和溶酶體逃逸效率37-38
• 3.6 結(jié)論38-39
• 第四章 胺基聚甲基丙烯酸縮水甘油酯季銨鹽抗菌性能的研究39-48
• 4.1 實驗儀器與試劑39-40
• 4.1.1 實驗儀器與主要設(shè)備39
• 4.1.2 材料與試劑39-40
• 4.2 產(chǎn)物的表征40
• 4.3 胺基 PGOHMA 與 QPGMA 溶解度測試40
• 4.4 熱重分析（TGA）40
• 4.5 抗菌活性的研究40-41
• 4.5.1 細菌的形態(tài)和細胞結(jié)構(gòu)40
• 4.5.2 革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌細胞壁的化學結(jié)構(gòu)和組成40
• 4.5.3 培養(yǎng)基的配制40-41
• 4.5.4 抑菌環(huán)實驗41
• 4.5.5 最低抑菌濃度（MIC）測定41
• 4.5.6 抑菌率的測定41
• 4.6 結(jié)果與討論41-47
• 4.6.1 胺基 PGOHMA 與 QPGMA 溶解度測試44
• 4.6.2 熱重分析（TGA）44-45
• 4.6.3 抑菌環(huán)實驗45
• 4.6.4 最低抑菌濃度和抑菌率45-47
• 4.7 結(jié)論47-48
• 第五章 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-59
• 發(fā)表論文和科研情況說明59-60
• 致謝60-61

【共引文獻】

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本文編號：319871