聚羥基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates, PHAs）為生物綠色合成,具有生物可降解性、優(yōu)良的生物相容性以及可控的力學(xué)性能,在組織工程支架材料領(lǐng)域受到廣泛的關(guān)注與研究。PHAs在細(xì)菌體內(nèi)以包涵體顆粒的形式存在,許多蛋白位于PHAs顆粒的表面,其中包括調(diào)控蛋白PhaR。細(xì)胞黏附肽KQAGDV（Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val）六肽序列是細(xì)胞表面整合素的非特異性配體之一,能夠有效促進(jìn)細(xì)胞,特別是血管平滑肌細(xì)胞的黏附。本論文構(gòu)建、表達(dá)并純化PhaR-KQAGDV融合蛋白,通過(guò)PhaR蛋白與PHAs材料的疏水結(jié)合,介導(dǎo)細(xì)胞黏附肽KQAGDV對(duì)PHAs材料表面進(jìn)行仿生修飾,以期提高其細(xì)胞相容性,進(jìn)一步拓寬PHAs在組織工程研究領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。本工作對(duì)PHAs材料表面進(jìn)行PhaR介導(dǎo)的KQAGDV多肽仿生修飾,以未經(jīng)蛋白修飾的和只用PhaR蛋白修飾的材料為對(duì)照,探討KQAGDV六肽對(duì)PHAs材料細(xì)胞相容性的促進(jìn)作用。通過(guò)熒光顯微鏡觀察PhaR-EGFP蛋白在不同PHAs材料表面的結(jié)合情況,明亮的綠色熒光說(shuō)明PhaR蛋白能夠很好的吸附于材料表面。靜態(tài)水接觸角檢測(cè)結(jié)果表... 

【文章來(lái)源】：汕頭大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
論文中重要的縮略詞
第一章 引言
    1.1 組織工程概述
    1.2 組織工程支架材料
        1.2.1 支架材料的作用及理想支架材料的要求
        1.2.2 組織工程材料的發(fā)展趨勢(shì)
    1.3 組織工程材料的相容性
        1.3.1 材料的相容性
        1.3.2 細(xì)胞外基質(zhì)分子
        1.3.3 生物材料和細(xì)胞的相互作用
    1.4 組織工程材料表面修飾
        1.4.1 在材料表面固定蛋白質(zhì)
        1.4.2 在材料表面固定氨基酸
        1.4.3 在材料表面固定多肽
    1.5 仿生修飾肽KQAGDV 簡(jiǎn)介
    1.6 聚羥基脂肪酸酯在組織工程中的應(yīng)用
        1.6.1 聚羥基脂肪酸酯概述
        1.6.2 聚羥基脂肪酸酯的生物相容性
        1.6.3 聚羥基脂肪酸酯在體內(nèi)的自然分布
        1.6.4 聚羥基脂肪酸酯的體內(nèi)生物吸收性
    1.7 聚羥基脂肪酸酯顆粒表面結(jié)合蛋白
        1.7.1 PHA 聚合酶(Synthase, PhaC)
        1.7.2 PHA 解聚酶(Depolymerase, PhaZ)
        1.7.3 PHA 顆粒結(jié)合蛋白（Phasins, PhaP）
        1.7.4 調(diào)控蛋白（Regulator protein, PhaR）
    1.8 論文的目的及意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 蛋白PhaR 和PhaR-KQAGDV 的質(zhì)粒構(gòu)建與表達(dá)
        2.1.1 菌種與質(zhì)粒
        2.1.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）所用引物
        2.1.3 分子量標(biāo)準(zhǔn)
        2.1.4 分子生物學(xué)常用的工具酶
        2.1.5 分子生物學(xué)常用的試劑盒
        2.1.6 常用生化試劑
        2.1.7 常用儀器和設(shè)備
        2.1.8 常用培養(yǎng)基的配制
        2.1.9 分子生物學(xué)常用溶液及緩沖液的配制
        2.1.10 分子生物學(xué)基本操作
        2.1.11 菌種保存方法
        2.1.12 融合蛋白的表達(dá)與制備
        2.1.13 融合蛋白的純化
        2.1.14 蛋白透析
        2.1.15 少量細(xì)菌總蛋白裂解液的制備
        2.1.16 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.1.17 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定
    2.2 PHAs 材料的制備及參數(shù)評(píng)價(jià)
        2.2.1 PHAs 及PLA 材料成膜
        2.2.2 膜表面形貌表征
        2.2.3 熒光顯微鏡觀察PhaR 蛋白在不同PHAs 材料上的吸附情況
        2.2.4 PhaR-KQAGDV 蛋白表面修飾PHAs 膜
        2.2.5 樣品接觸角測(cè)量
    2.3 細(xì)胞相容性評(píng)價(jià)
        2.3.1 藥品及試劑
        2.3.2 常用溶液
        2.3.3 常用儀器設(shè)備
        2.3.4 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.3.5 細(xì)胞傳代
        2.3.6 細(xì)胞接種和培養(yǎng)
        2.3.7 仿生修飾后PHAs 材料的細(xì)胞相容性研究
    2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第三章 PhaR、PhaR-KQAGDV 蛋白的質(zhì)粒構(gòu)建、表達(dá)與純化
    3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    3.2 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
    3.3 討論
第四章 材料的制備及性能評(píng)價(jià)
    4.1 不同PHAs 膜的表面形貌觀察
    4.2 熒光顯微鏡觀察PhaR-EGFP 蛋白在不同材料上的吸附情況
    4.3 蛋白PhaR-KQAGDV 修飾前后PHAs 靜態(tài)水接觸角變化
    4.4 討論
第五章 仿生修飾后PHAs 材料的細(xì)胞相容性研究
    5.1 蛋白PhaR-KQAGDV 在膜表面的吸附性能評(píng)價(jià)
    5.2 細(xì)胞黏附表征
        5.2.1 CCK-8 試驗(yàn)測(cè)定HuSMCs 代謝活性
        5.2.2 激光共聚焦顯微鏡觀察HuSMCs 數(shù)目變化
    5.3 細(xì)胞增殖表征
        5.3.1 CCK-8 試驗(yàn)測(cè)定HuSMCs 代謝活性
        5.3.2 SEM 觀察HuSMCs 在PHAs 膜上的分布和形貌
    5.4 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷及發(fā)表論文情況
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組織工程支架材料研究進(jìn)展[J]. 焦國(guó)豪.  化工中間體. 2007(04)
[2]生物材料和再生醫(yī)學(xué)的進(jìn)展[J]. 孫雪,奚廷斐.  中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2006(02)
[3]組織工程學(xué)的研究進(jìn)展[J]. 曹誼林.  中國(guó)美容醫(yī)學(xué). 2005(02)
[4]Biocompatibility of Modified Poly-β-Hydroxybutyric Acid to Adrenocortical Cells[J]. 吳天鵬.  Journal of Wuhan University of Technology-Materials Science. 2004(02)
[5]骨組織工程支架及生物材料研究[J]. 方麗茹,翁文劍,沈鴿,韓高榮,Santos JD.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2003(01)
[6]骨組織工程及可吸收高分子支架的研究進(jìn)展[J]. 馬朋高,游秀東,高建平,于九皋,姚康德.  化學(xué)通報(bào). 2001(07)
[7]可生物降解的高分子類(lèi)型、合成和應(yīng)用[J]. 王身國(guó).  化學(xué)通報(bào). 1997(02)



本文編號(hào)：3183108