聚羥基脂肪酸酯（Polyhydroxyalkanoates, PHAs）為生物綠色合成,具有生物可降解性、優(yōu)良的生物相容性以及可控的力學性能,在組織工程支架材料領域受到廣泛的關注與研究。PHAs在細菌體內以包涵體顆粒的形式存在,許多蛋白位于PHAs顆粒的表面,其中包括調控蛋白PhaR。細胞黏附肽KQAGDV（Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val）六肽序列是細胞表面整合素的非特異性配體之一,能夠有效促進細胞,特別是血管平滑肌細胞的黏附。本論文構建、表達并純化PhaR-KQAGDV融合蛋白,通過PhaR蛋白與PHAs材料的疏水結合,介導細胞黏附肽KQAGDV對PHAs材料表面進行仿生修飾,以期提高其細胞相容性,進一步拓寬PHAs在組織工程研究領域的開發(fā)應用。本工作對PHAs材料表面進行PhaR介導的KQAGDV多肽仿生修飾,以未經蛋白修飾的和只用PhaR蛋白修飾的材料為對照,探討KQAGDV六肽對PHAs材料細胞相容性的促進作用。通過熒光顯微鏡觀察PhaR-EGFP蛋白在不同PHAs材料表面的結合情況,明亮的綠色熒光說明PhaR蛋白能夠很好的吸附于材料表面。靜態(tài)水接觸角檢測結果表... 

【文章來源】：汕頭大學廣東省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
論文中重要的縮略詞
第一章 引言
    1.1 組織工程概述
    1.2 組織工程支架材料
        1.2.1 支架材料的作用及理想支架材料的要求
        1.2.2 組織工程材料的發(fā)展趨勢
    1.3 組織工程材料的相容性
        1.3.1 材料的相容性
        1.3.2 細胞外基質分子
        1.3.3 生物材料和細胞的相互作用
    1.4 組織工程材料表面修飾
        1.4.1 在材料表面固定蛋白質
        1.4.2 在材料表面固定氨基酸
        1.4.3 在材料表面固定多肽
    1.5 仿生修飾肽KQAGDV 簡介
    1.6 聚羥基脂肪酸酯在組織工程中的應用
        1.6.1 聚羥基脂肪酸酯概述
        1.6.2 聚羥基脂肪酸酯的生物相容性
        1.6.3 聚羥基脂肪酸酯在體內的自然分布
        1.6.4 聚羥基脂肪酸酯的體內生物吸收性
    1.7 聚羥基脂肪酸酯顆粒表面結合蛋白
        1.7.1 PHA 聚合酶(Synthase, PhaC)
        1.7.2 PHA 解聚酶(Depolymerase, PhaZ)
        1.7.3 PHA 顆粒結合蛋白（Phasins, PhaP）
        1.7.4 調控蛋白（Regulator protein, PhaR）
    1.8 論文的目的及意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 蛋白PhaR 和PhaR-KQAGDV 的質粒構建與表達
        2.1.1 菌種與質粒
        2.1.2 聚合酶鏈式反應（PCR）所用引物
        2.1.3 分子量標準
        2.1.4 分子生物學常用的工具酶
        2.1.5 分子生物學常用的試劑盒
        2.1.6 常用生化試劑
        2.1.7 常用儀器和設備
        2.1.8 常用培養(yǎng)基的配制
        2.1.9 分子生物學常用溶液及緩沖液的配制
        2.1.10 分子生物學基本操作
        2.1.11 菌種保存方法
        2.1.12 融合蛋白的表達與制備
        2.1.13 融合蛋白的純化
        2.1.14 蛋白透析
        2.1.15 少量細菌總蛋白裂解液的制備
        2.1.16 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.1.17 蛋白質含量的測定
    2.2 PHAs 材料的制備及參數(shù)評價
        2.2.1 PHAs 及PLA 材料成膜
        2.2.2 膜表面形貌表征
        2.2.3 熒光顯微鏡觀察PhaR 蛋白在不同PHAs 材料上的吸附情況
        2.2.4 PhaR-KQAGDV 蛋白表面修飾PHAs 膜
        2.2.5 樣品接觸角測量
    2.3 細胞相容性評價
        2.3.1 藥品及試劑
        2.3.2 常用溶液
        2.3.3 常用儀器設備
        2.3.4 細胞復蘇
        2.3.5 細胞傳代
        2.3.6 細胞接種和培養(yǎng)
        2.3.7 仿生修飾后PHAs 材料的細胞相容性研究
    2.4 統(tǒng)計學方法
第三章 PhaR、PhaR-KQAGDV 蛋白的質粒構建、表達與純化
    3.1 重組質粒的構建
    3.2 融合蛋白的誘導表達及純化
    3.3 討論
第四章 材料的制備及性能評價
    4.1 不同PHAs 膜的表面形貌觀察
    4.2 熒光顯微鏡觀察PhaR-EGFP 蛋白在不同材料上的吸附情況
    4.3 蛋白PhaR-KQAGDV 修飾前后PHAs 靜態(tài)水接觸角變化
    4.4 討論
第五章 仿生修飾后PHAs 材料的細胞相容性研究
    5.1 蛋白PhaR-KQAGDV 在膜表面的吸附性能評價
    5.2 細胞黏附表征
        5.2.1 CCK-8 試驗測定HuSMCs 代謝活性
        5.2.2 激光共聚焦顯微鏡觀察HuSMCs 數(shù)目變化
    5.3 細胞增殖表征
        5.3.1 CCK-8 試驗測定HuSMCs 代謝活性
        5.3.2 SEM 觀察HuSMCs 在PHAs 膜上的分布和形貌
    5.4 討論
第六章 結論
參考文獻
致謝
個人簡歷及發(fā)表論文情況
在校期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3183108