目的:探討轉錄抑制因子——鋅指蛋白和同源框3（zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3）基因沉默對骨髓間充質干細胞（bone marrow stem cells,BMSCs）中BMP2/smad通路相關因子骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）、磷酸化smad1（phospho-smad1（或pho-smad1））表達的影響。方法:構建ZHX3低表達慢病毒載體轉染大鼠BMSCs,同時設陰性對照空載病毒轉染BMSCs及空白對照不做任何處理的BMSCs。采用熒光顯微鏡下測定細胞轉染率、免疫印跡技術鑒定轉染效果、免疫細胞化學和免疫印跡技術定性定量檢測ZHX3沉默時BMP2、pho-smad1和smad4的表達情況。細胞經成骨誘導液處理后進行堿性磷酸酶和茜素紅染色檢測各組細胞成骨能力。結果:1復蘇培養(yǎng)的細胞具有BMSCs形態(tài)。2轉染后,ZHX3低表達組和空載體對照組均表達綠色熒光,轉染率分別為（93.18±4.41）%和（92.56±4.35）%,空白對照組不表達熒光,未見轉染陽性細胞（F=1 123.464,P<0... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學學報. 2016,41(10)北大核心CSCD

【文章頁數】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
        1.2.1 SD大鼠BMSCs的復蘇培養(yǎng)與傳代
        1.2.2 一般狀態(tài)觀察及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)檢測
        1.2.3 慢病毒轉染BMSCs及鑒定
        1.2.4 實驗分組
        1.2.5 免疫熒光法檢測BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表達
        1.2.6免疫印跡法檢測BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表達
        1.2.7 BMSCs的誘導分化
        1.2.8 茜素紅染色
        1.2.9 堿性磷酸酶染色
    1.3 統(tǒng)計學處理
2 結果
    2.1 BMSCs的培養(yǎng)
    2.2 一般狀態(tài)觀察及MTT檢測
    2.3 慢病毒轉染BMSCs及鑒定
    2.4 免疫熒光檢測BMP2、phos-smad1和smad4表達情況
    2.5 免疫印跡檢測BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表達
    2.6 茜素紅染色
    2.7 堿性磷酸酶染色
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Osteogenic differentiation of amniotic fluid mesenchymal stromal cells and their bone regeneration potential[J]. Caterina Pipino,Assunta Pandolfi.  World Journal of Stem Cells. 2015(04)
[2]ZHX3基因轉染BMSCs及對體外成骨能力的實驗研究[J]. 李季,秦書儉,包翠芬,桑瑤采,屈惠瑩.  中國臨床解剖學雜志. 2014(02)
[3]成人骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)、鑒定與成骨誘導[J]. 張銘杰,張慶文,何偉,陳鎮(zhèn)秋,歐志學,賈曉軍.  中國組織工程研究. 2013(45)



本文編號：3181658